突变型鸡Myostatin基因的检测方法在鸡育种中的应用

医药数据库中心药学论坛

公开(公告)号	CN1233848C
公开(公告)日	2005.12.28
申请(专利)号	CN03132412.6
申请日期	2003.05.30
专利名称	突变型鸡Myostatin基因的检测方法在鸡育种中的应用
主分类号	C12Q1/68
分类号	C12Q1/68
分案原申请号
优先权
申请(专利权)人	哈尔滨工业大学
发明(设计)人	朱大海;顾志良;李晖;李宁
地址	150001黑龙江省哈尔滨市南岗区西大直街92号
颁证日
国际申请
进入国家日期
专利代理机构	哈尔滨市松花江专利商标事务所
代理人	毕志铭
国省代码	黑龙江;23
主权项	突变型鸡Myostatin基因的检测方法在鸡育种中的应用，其特征在于第一步：PCR引物的设计：根据本实验室克隆的鸡Myostatin基因组全序列设计了3对引物如下：P605′-TCCTATCAGGAAAACCTATC-3′P615′-ACCTCAAGGAAAATTCTGAG-3′P935′-CAACTTTCAGTAATAATGGAA-3′P945′-TGATAGGTTTTCCTGATAGGTA-3′P805′-CTAAACGTAGTAAAACAAAAGGCAGC-3′P815′-AACATTTATTTACAAAATATTGATG-3′第二步：鸡基因组DNA的提取；第三步：PCR扩增，PCR扩增反应体系为10×PCRbuffer2.5μl，10mmol/LdNTPs2μl，20μmol/L上游引物1μl，20μmol/L下游引物1μl，Taq酶1.0U，15ng/μlDNA模板4.0μl，ddH2O13.3μl；PCR程序为94℃5min1个循环；94℃40s，57℃40s，72℃40s共35个循环；72℃8min1个循环；4℃保温；第四步：SSCP分析，1μlPCR产物和5μlLoadingbuffer混合，98℃变性10min，冰浴5min，经14％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析后银染显色；第五步骤：(1)、用引物P80/P81进行PCR-SSCP分析Mostatin基因是否是以下基因型：AAATGGATTCCTCGTGTTTGCAATGTATTTATTACGTATTBBATAGATTCCTCGTGTTTGCAGTGTATTTATTATGTATTABATA/GGATTCCTCGTGTTTGCAA/GTGTATTTATTAC/TGTATT(2)、用引物P93/P94进行PCR-SSCP分析Mostatin基因是否是以下基因型：EEATTTTGATACTAAAGGGTCCAATAGTTAFFATTTTGATACTAGAGGGTCCAATAGTTAEFATTTTGATACTAA/GAGGGTCCAATAGTTA(3)、用引物P80/P81进行PCR-SSCP分析Mostatin基因是否是以下基因型：CCTTGCTACAGAAATTGTTAAAAAACDDTTGCTACAGATATTGTTAAAAAACCDTTGCTACAGAA/TATTGTTAAAAAAC第六步骤：根据各基因型的以下特性选择需要的种鸡，腹脂重、腹脂率、初生重、胸肌率：AA＞AB＞BB胸肌重：EF＞FF＞EE胸肌重、胸肌率：CC＞CD＞DD。
摘要	突变型鸡Myostatin基因的检测方法在鸡育种中的应用，它涉及鸡遗传育种改良的生物技术。该突变型鸡的Myostatin基因的核苷酸多态性为：G→A(304位)，A→G(322位)，C→T(334位)，G→A(167位)，7263A→A。本发明的育种方法按照如下步骤进行：一、PCR引物的设计，二、鸡基因组DNA的提取；三、PCR扩增；四、SSCP分析；五、对被提取基因进行分析；六、根据各基因型的特性选择种鸡。本发明是一种准确、简单、迅速、直接检测Myostatin基因单核苷酸多态性方法，利用该方法可以对种鸡进行遗传标记辅助选择育种，从而可以从根本上解决传统遗传育种中由于对肉鸡生长速度过高追求，带来的问题。
国际公布