| 公开(公告)号 | CN1233835C |
| 公开(公告)日 | 2005.12.28 |
| 申请(专利)号 | CN03130528.8 |
| 申请日期 | 2003.07.31 |
| 专利名称 | 总状共头霉代谢物杀线虫活性组分的分离纯化方法 |
| 主分类号 | C12P7/44 |
| 分类号 | C12P7/44;A01N37/00;//C12P7/44,C12R1∶645 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 天津师范大学 |
| 发明(设计)人 | 孙建华;杜连祥;杜 淼;王海宽;王瑾玲;赵小军;张 颖;路福平;李 喆 |
| 地址 | 300074天津市河西区卫津路241号天津师范大学 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 天津市学苑有限责任专利代理事务所 |
| 代理人 | 李 明 |
| 国省代码 | 天津;12 |
| 主权项 | 总状共头霉代谢物杀线虫活性组分的分离纯化方法，其特征是将总状共头霉代谢产物的发酵原液，采用旋转薄膜蒸发、重结晶、弱碱性阴离子交换树脂分离方法，经过紫外、红外光谱及X射线单晶衍射和高效液相色谱进行分析鉴定，确定了杀虫活性组分中含有有机酸，即为乙二酸，还有苹果酸、酒石酸和乳酸；经浓缩重结晶技术得到含两个结晶水的乙二酸及8配位钾的乙二酸配合物；总状共头霉代谢产物杀线虫活性物质的分离纯化工艺：发酵液经真空抽滤得到发酵滤液，此后，将部分滤液即发酵原液通过离子交换柱进行层析分离，然后再通过高效液相色谱对分离组分进行检测鉴定；另一方面将剩余滤液即发酵原液经旋转薄膜蒸发，获得浓缩液，再将浓缩液中析出晶体与母液分离，其中的晶体经重结晶获得单晶，通过紫外、红外光谱及X射线单晶衍射进行结构分析；其母液则经凝胶层析进行分离纯化；分离纯化的具体方法：(1)杀线虫活性组分单晶的分离、纯化和结构鉴定：发酵滤液经旋转薄膜蒸发浓缩10-20倍后，有晶体物质析出，将析出的晶体在60-80℃下溶解后，冰箱冷藏室中或室温下进行重结晶，得到一个单晶；室温下进行重结晶得到另一个单晶；经熔点、紫外、红外光谱测定以及X射线晶体衍射进行结构鉴定，证明前者为含两个结晶水的乙二酸，其分子式为(H2C2O4)(H2O)2，后者为8配位钾的乙二酸配合物，其分子式为K(H2C2O4)(HC2O4)(H2O)2，其结构见图1；二者均有杀线虫活性，两个结晶水的乙二酸单晶最低有效剂量即MED为2mg/ml，杀虫活性为83％，单晶8配位钾的乙二酸配合物的最低有效剂量MED为4mg/ml，杀虫活性为76％；(2)滤液中有机酸的分离和鉴定：离子交换柱层析：将发酵滤液用弱碱性阴离子交换树脂进行初步分离，上样量10-15ml，用水或添加0.15mol/L的氯化钠溶液平衡柱，再依次用水和稀氨水进行洗脱，流速0.5ml/min-5ml/min，分部收集到不同含量的有机酸样品，再经高效液相分析，酸性物质包括乙二酸，酒石酸，苹果酸和乳酸。 |
| 摘要 | 总状共头霉代谢物杀线虫活性组分的分离纯化方法，属于开发新型杀线虫生物制剂，特别涉及水溶性杀线虫生物防菌代谢物及活性组分的分离纯化方法。本发明克服了水溶性总状共头霉代谢物分离困难的问题；提供了其杀线虫活性组份的分离与纯化方法，其具体方法是将发酵原液，采用旋转薄膜蒸发、重结晶、弱碱性阴离子交换树脂分离方法，经过紫外、红外光谱及X射线单晶衍射和高效液相色谱进行分析鉴定。获得了杀线虫活性高、杀虫谱广、热稳定性强、水溶性的新型杀线虫生物制剂；首次证明该菌代谢物中杀线虫活性组份含带两个结晶水的乙二酸和具有新型结构的8配位钾的乙二酸配合物，此项研究对线虫的生物防治具有重要的理论意义和广阔的应用前景。 |
| 国际公布 |
