| 公开(公告)号 | CN1233826C |
| 公开(公告)日 | 2005.12.28 |
| 申请(专利)号 | CN02108141.7 |
| 申请日期 | 2002.03.27 |
| 专利名称 | 一种重组毕赤酵母乳糖酶及其应用 |
| 主分类号 | C12N9/38 |
| 分类号 | C12N9/38;C12N15/56;//(C12N9/38,C12R1:85) |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 发明(设计)人 | 范云六;姚 斌;张 伟;赵 军 |
| 地址 | 100081北京市中关村南大街12号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 中科专利商标代理有限责任公司 |
| 代理人 | 姜兆元 |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | 一种发酵生产乳糖酶的方法，包括以下步骤：a.将含有乳糖酶编码基因的重组酵母菌株接种培养，然后按5～10％接种量再接种于含3～5％葡萄糖发酵培养基10×Basalsalts中；b.通气搅拌培养，在整个培养过程中氧饱和度不低于20％；c.14～24小时后，按照12～24mL/hr/L的流量流动加入18～35％的葡萄糖溶液继续培养2～8小时；d.按照2～8mL/hr/L的流量流动加入18～35％葡糖糖∶甲醇＝2～6∶1～4混合溶液，继续培养2～8小时；e.加入诱导剂甲醇，使甲醇的终浓度维持在0.1～0.5％，继续培养至少5小时；其中，所述乳糖酶编码基因基于下述核苷酸序列：1ATGAAGCTCCTCTCTGTTGCTGCTGTTGCCTTGCTGGCGGCACAGGCAGCGGGTGCTTCCATCAAGCATCGTCTCAATGGCTTCACGATC91CTGGAACATCCGGATCCGGCGAAAAGAGACTTGCTGCAAGACATTGTATGTCGTCATCAAATCTGAATCACTAGCTATGCTCCATAGTGA181TTATGTAAACATACTGACCCTCTGCAGGTTACATGGGATGACAAATCTCTGTTCATCAATGGAGAGAGGATTATGTTATTCAGCGGAGAA271GCATCCTTTCAGGTACACTAGCCCCGCGTACTTCTATGGTTTAATTCTGATGAAAACAGATTGCCAGTACCTTCGCTTTGGCTTGATA361TTCCACAAGATCAGAGCTCTTGGTTTCAACTGTGTATCTTTCTATATTGATTGGGCTCTTCTGGAGGGAAAGCCTGGCGACTACAGAG452GAAGGCATCTTTGCTCTGGAACCCTTCTTCGATGCAGCCAAGGAAGCAGGCATTTATCTGATCGCCCGCCCCGGTTCGTACATCAATG541CCGAGGTCTCAGGCGGTGGCTTCCCTGGATGGTTGCAGAGGGTCAATGGCACTCTTCGCTCGTCTGATGAGCCATTCCTTAAAGCTACTG631AAGTATGGGCTCATTGATGAGCTACTTCAGACACTTGCTTACAGTGTGATTTTAGCTATATCGCCAATGCCGCTGCTGCCGTGGCGAA721GGCTCAAATCACGAATGGAGGGCCAGTAATTCTCTACCAGCCCGAAAACGAATACAGCGGTGGCTGCTGCGGTGTCAAATACCCCGATGC811AGACTACATGCAGTATGTTATGGATCAGGCCCGGAAGGCTGACATTGTTGTACCTTTCATCAGCAACGATGCCTCACCTTCTGGGCACAA901TGCTCCTGGAAGTGGAACGGGCGCTGTTGATATTTATGGTCACGATAGCTATCCGTAAGTTATTCTGCATATGAGCTCCTTTCTTTTAGA991GATTTTCCGTTTGACGGCAACTGACATTTACCTAGCCTTGGCTTTGATTGCGTATGTTCTATCCTGCGAGCGAGATTGAATACTTCTGAC1081GTATATAGGCAAACCCATCCGTATGGCCCGAGGGTAAACTGCCCGACAACTTCCGCACGCTCCATCTTGAGCAGAGCCCATCAACTCCGT1171ATTCACTTCTTGAGGTAAGTTACTACTCAGCCTCGAGGACTAGTAATGTGTCTCACTGTCTTTTAGTTCCAAGCGGGTGCTTTCGACCCA1261TGGGGTGGACCCGGCTTTGAAAAATGCTATGCCCTCGTTAACCACGAATTCTCGAGAGTTTTCTATAGGAACGACTTGAGTTTCGGAGTT1351TCTACCTTTAACTTATACATGGTATGGTCTATTCATATCTCTGGAACATACATCGCGCTGACAATATATAGACTTTCGGCGGAACAAACT1441GGGGTAACCTCGGACATCCCGGTGGATATACATCCTACGACTACGGCTCGCCTATAACTGAAACGCGAAACGTTACACGGGAGAAGTACA1531GCGACATAAAGCTCCTTGCCAACTTTGTCAAAGCATCGCCATCCTATCTCACCGCTACTCCCAGAAACCTGACTACTGGTGTTTACACAG1621ACACATCTGACCTGGCTGTCACCCCGTTAATGGGTGATAGTCCAGGCTCATTCTTCGTGGTCAGACATACGGACTATTCCAGCCAAGAGT1711CAACCTCGTACAAACTTAAGCTTCCTACCAGTGCTGGTAACCTGACTATTCCCCAGCTGGAGGGCACTCTAAGTCTCAACGGACGTGACT1801CAAAAATTCATGTTGTTGATTATAATGTGTCTGGAACGAACATTATCTATTCGACAGCTGAAGTCTTCACCTGGAAGAAGTTTGACGGTA1891ACAAGGTCCTGGTGTTATACGGCGGACCGAAGGAACACCATGAATTGGCCATTGCCTCCAAGTCAAATGTGACCATCATCGAAGGTTCGG1981ACTCTGGAATTGTCTCAACGAGGAAGGGCAGCTCTGTTATCATTGGCTGGGATGTCTCTTCTACTCGTCGCATCGTTCAAGTCGGTGACT2071TGAGAGTGTTCCTGCTTGGTAAGTGAATTCACAAGAAACTCGCGTTCACGACTAATGAATCCACAGATAGAAACTCTGCTTACAACTACT2161GGGTCCCCGAACTCCCCACAGAAGGTACTTCTCCCGGGTTCAGCACTTCGAAGACGACCGCCTCCTCCATTATTGTGAAGGCCGGCTACC2251TCCTCCGAGGGGCTCACCTGGATGGTGCTGATCTTCATCTTACTGCTGATTTCAATGCCACCACCCCGATTGAAGTGATCGGTGCTCCAA2341CAGGCGCCAAGAATCTGTTCGTGAATGGTGAAAAGGCTAGCCACACAGTCGACAAAAACGGCATCTGGAGCAGTGAGGTCAAGTACGCGG2431CTCCAGAGATCAAGCTCCCCGGTTTGAAGGATTTGGACTGGAAGTATCTGGACACGCTTCCCGAAATTAAGTCTTCCTATGATGACTCGG2521CCTGGGTTTCGGCAGACCTTCCAAAGACAAAGAACACTCACCGTCCTCTTGACACACCAACATCGCTATACTCCTCTGACTATGGCTTCC2611ACACTGGCTACCTGATCTACAGGGGTCACTTCGTTGCCAACGGCAAGGAAAGCGAATTTTTTATTCGCACACAAGGCGGTAGCGCATTCG2701GAAGTTCCGTATGGCTGAACGAGACGTATCTGGGCTCTTGGACTGGTGCCGATTATGCGATGGACGGTAACTCTACCTACAAGCTATCTC2791AGCTGGAGTCGGGCAAGAATTACGTCATCACTGTGGTTATTGATAACCTGGGTCTCGACGAGAATTGGACGGTCGGCGAGGAAACCATGA2881AGAATCCTCGTGGTATTCTTAGCTACAAGCTGAGCGGACAAGACGCCAGCGCAATCACCTGGAAGCTCACTGGTAACCTCGGAGGAGAAG2971ACTACCAGGATAAGGTTAGAGGACCTCTCAACGAAGGTGGACTGTACGCAGAGCGCCAGGGCTTCCATCAGCCTCAGCCTCCAAGCGAAT3061CCTGGGAGTCGGGCAGTCCCCTTGAAGGCCTGTCGAAGCCGGGTATCGGATTCTACACTGCCCAGTTCGACCTTGACCTCCCGAAGGGCT3151GGGATGTGCCGCTGTACTTCAACTTTGGCAACAACACCCAGGCGGCTCGGGCCCAGCTCTACGTCAACGGTTACCAGTATGGCAAGTTCA3241CTGGAAACGTTGGGCCACAGACCAGCTTCCCTGTTCCCGAAGGGATCCTGAACTACCGCGGAACCAACTATGTGGCACTGAGTCTTTGGG3331CATTGGAGTCGGACGGTGCTAAGCTGGGTAGCTTCGAACTGTCCT |
| 摘要 | 本发明包括一种性质优良的乳糖酶其编码基因的克隆、高效表达乳糖酶的重组毕赤酵母的构建以及重组酵母的高密度发酵大量产生乳糖酶的方法。重组酵母中乳糖酶的表达量可达到6mg/mL发酵液。高效表达乳糖酶的重组酵母可用来大规模工业化廉价生产乳糖酶。 |
| 国际公布 |
