| 公开(公告)号 | CN1231598C |
| 公开(公告)日 | 2005.12.14 |
| 申请(专利)号 | CN03131899.1 |
| 申请日期 | 2003.06.13 |
| 专利名称 | 一种重组禽腺病毒的制备方法 |
| 主分类号 | C12Q1/68 |
| 分类号 | C12Q1/68;C12N15/861;C12N7/01 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 扬州大学 |
| 发明(设计)人 | 秦爱建;何秀苗;刘岳龙;金文杰 |
| 地址 | 225009江苏省扬州市大学南路88号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 扬州市锦江专利事务所 |
| 代理人 | 江 平 |
| 国省代码 | 江苏;32 |
| 主权项 | 一种重组禽腺病毒的制备方法，其特征在于由以下步骤完成：1)以中国鸡群分离的I群禽腺病毒为材料，通过PCR方法将病毒基因组的两个末端，即L片段和r片段，以及右ITR片段扩增出来，克隆进载体，并以报告基因EGFP插入设计好的r片段和右ITR片段之间，构建转移质粒载体；2)将构建的禽腺病毒转移质粒载体转染已被野生病毒感染了的鸡胚肾细胞，进行同源重组，筛选重组病毒；上述扩增基因组左末端L片段的上、下游引物分别是：PL1：5’ggggcggccgcgatgatgtataataacct3’PL2：5’gggtctagactcacgcgacatgactgtct3’上述扩增基因组右末端r片段的上、下游引物分别是：Pr1：5’gcgtctagaccagaaccattcttcagccg3’PL2：5’gcggaattcgtaccggactgttgtgcgga3’上述扩增基因组右ITR片段的上、下游引物分别是：PITR1：5’gcggaattcacacacggacaacttcaaag3’PITR2：5’gcggtcgacgatgatgtataataacctc3’。 |
| 摘要 | 本发明属于生物技术制药工业中的基因工程生产疫苗药物的技术领域。以中国分离的I群禽腺病毒为材料，通过PCR方法将该病毒基因组的两个末端L片段和r片段、ITR片段扩增出来，克隆进pHC粘粒载体中，并以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因为报告基因，插入设计好的r片段和ITR片段之间，构建转移质粒载体pFAV-eGFP，然后转染已被野生病毒感染了的鸡胚肾细胞，进行同源重组，筛选重组病毒，获得表达增强型绿色荧光蛋白的重组禽腺病毒。从而确定位于基因组右末端r片段和ITR片段之间的位点为病毒复制非必需区，并以此为载体开发研制相关基因工程产品。 |
| 国际公布 |
