| 公开(公告)号 | CN1228442C |
| 公开(公告)日 | 2005.11.23 |
| 申请(专利)号 | CN03139762.X |
| 申请日期 | 2003.07.09 |
| 专利名称 | 胚胎干细胞定向诱导分化为肝细胞的方法 |
| 主分类号 | C12N5/00 |
| 分类号 | C12N5/00;C12N5/06 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 暨南大学 |
| 发明(设计)人 | 胡安斌;蔡继业 |
| 地址 | 510632广东省广州市天河区石牌 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 广州华进联合专利商标代理有限公司 |
| 代理人 | 王东亮 |
| 国省代码 | 广东;44 |
| 主权项 | 一种胚胎干细胞定向诱导分化为肝细胞的方法，其特征是：其具体的诱导分化步骤如下：(1)、ES细胞培养：将保存在液氮中的BALB/c系小鼠的ES细胞取出，立即置于37-39℃的环境中解冻复苏，离心弃上清去除DMSO以及残存的胰酶，加入ES培养基吹散，以2×104cells/ml的密度将细胞转至一次性塑料培养瓶中，每天换液一次，每2-3天传代一次；(2)、ES细胞发育为EBs：上述的ES细胞换用EBs培养基，将细胞转至未经过促细胞黏附作用处理、瓶底光滑的玻璃培养瓶中用摇动培养法培养，每1小时摇动细胞一次，使其悬浮生长发育为EBs，第2-3天每3小时摇动一次，第4-5天每小时摇动一次；EBs的发育分化期间每1-2天换液一次，摇动培养法培养5天；(3)、肝细胞定向诱导分化：EBs悬浮发育生长5天后，于第6天转至0.1％白明胶处理过的6孔培养板和24孔培养板上，让其充分贴壁生长分化，每2天换液一次，胚体贴壁并向四周生长分化；第7天-第11天，加入aFGF，终浓度为100ng/ml；第7天-19天，加入TGF，终浓度为20ng/ml，AFP，终浓度为20ng/ml；第11天-第19天，加入HGF和OSM，终浓度分别为20ng/ml和10ng/ml，10-7M地塞米松，5μg/ml胰岛素，5μg/ml转铁蛋白，5μg/ml亚硒酸。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种胚胎干细胞诱导分化为肝细胞的方法，ES分化用的细胞生长因子分别是转化生长因子TGF，甲胎蛋白AFP，酸性纤维细胞生长因子aFGF，肝细胞生长因子HGF，制瘤素OSM，地塞米松DEX，以及胰导素、转铁蛋白、亚硒酸(ITS)，其肝细胞分化率为30％以上。 |
| 国际公布 |
