| 公开(公告)号 | CN1687448A |
| 公开(公告)日 | 2005.10.26 |
| 申请(专利)号 | CN200510025259.2 |
| 申请日期 | 2005.04.21 |
| 专利名称 | 用固定化α-葡萄糖苷酶模型筛选活性天然药物的方法 |
| 主分类号 | C12Q1/18 |
| 分类号 | C12Q1/18;C12Q1/25 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 上海大学 |
| 发明(设计)人 | 雍克岚;吕敬慈;卢大胜;陈 旭;顾慧娟 |
| 地址 | 200072上海市闸北区延长路149号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 上海上大专利事务所 |
| 代理人 | 顾勇华 |
| 国省代码 | 上海;31 |
| 主权项 | 一种用固定化α-葡萄糖苷酶筛选模型筛选天然药物的方法，其特征在于具有以下的过程和步骤：a.α-葡萄糖苷酶固定化：用三羟甲基磷为交联剂，以壳聚糖作载体固定化α-葡萄糖苷酶。b.制作α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型：将上述固定化α-葡萄糖苷酶装入直径为0.5～0cm。长度为5～10cm的层析柱中，柱中加入pH6.8的磷酸钾缓冲液，于4℃保存，构成筛选模型；c.模型有效性验证：用具有代表性的α-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖进行该筛选模型有效性验证，将上述柱子下端紧密插入带有活塞的小管，上端插入-注射器，将柱中的缓冲溶液压到离柱顶下约0.3～0cm后，分别加入4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷和一定量的阿卡波糖溶液，轻轻震荡使柱顶的溶溶混匀，然后继续压溶液至液面和柱顶相平，关上底端的活塞，再把该柱放入水浴槽，在37℃下温育数分钟，待反应完毕，用磷酸钾缓冲液冲洗柱内，收集洗液，把洗脱液稀释至5～20ml体积，用紫外分光光度计在400nm处测定吸光度值；并把上述的4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷、阿卡波糖溶液和缓冲液稀释至相同体积作空白，按照所得反应液的吸光度数据计算抑制剂阿卡波糖的抑制率；d.抑制率I(％)的计算：I(％)＝(ΔAE-ΔA)/ΔAE×100％；ΔAE＝未加抑制剂前固定化α-葡萄糖苷酶与4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷反应后的吸光度值(扣除相应空白)；ΔA＝加入抑制剂后固定化α-葡萄糖苷酶与4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷反应后的吸光度值(扣除相应空白)；C为抑制剂浓度，以C为横坐标，抑制率I％为纵坐标，作抑制剂浓度C与相应抑制率I％的回归曲线，并于50％抑制率处得到半抑制率浓度IC50；e.筛选模型的应用：参照上述验证固定化α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型的方法筛选天然药物中药虎仗和血竭，以IC50值作为判断抑制活性指标。 |
| 摘要 | 本发明涉及一种用固定化α-葡萄糖苷酶模型筛选活性天然药物的方法，属新药筛选化学工艺技术领域。本发明方法的特征在于具有以下过程和步骤：首先将α-葡萄糖苷酶固定化，制作α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型，用具有代表性的α-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖进行该筛选模型有效性验证；用固定化α-葡萄糖苷酶筛选模型筛选天然药物中药虎仗和血竭，其方法是将α-葡萄糖苷酶固定化，装入层析柱中，柱中加入pH6.8的磷酸钾缓冲液，构成筛选模型，于4℃保存；筛选时加入4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷及需筛选的中药虎仗或血竭，收集磷酸钾缓冲液柱洗脱液，然后用紫外分光光度计在400nm处测定其吸光度值，通过计算公式得其抑制率，并作出抑制剂浓度与相应抑制率的回归曲线，并于50％抑制率处得到半抑制率浓度IC50，以IC50值作为判断被筛选物质抑制活性的依据。 |
| 国际公布 |
