| 公开(公告)号 | CN1224704C |
| 公开(公告)日 | 2005.10.26 |
| 申请(专利)号 | CN03150527.9 |
| 申请日期 | 2003.08.20 |
| 专利名称 | 重组chBJSTWO蛋白的制备方法 |
| 主分类号 | C12N15/09 |
| 分类号 | C12N15/09;C12N15/12;C12N15/63;C12P21/00;A61K39/39;A61P37/04;A61P31/12;A61P31/04;A61P33/00 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 浙江大学 |
| 发明(设计)人 | 周继勇;陈吉刚;王金勇;吴建祥 |
| 地址 | 310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 杭州求是专利事务所有限公司 |
| 代理人 | 张法高 |
| 国省代码 | 浙江;33 |
| 主权项 | 一种重组chBJSTWO蛋白的制备方法，其特征在于它的步骤如下：1)自中国的仙居鸡、丝羽乌骨鸡和外来品种艾维茵肉鸡的脾淋巴细胞中克隆出chBJSTWO的cDNA与含有PBAD启动子的原核表达载体pBAD/HisB组建成表达载体pBAD/HisB/chBJSTWO；或者上述chBJSTWOcDNA与含有PAUG1启动子的真核表达载体pMETαA组建成分泌型表达载体pMETαA/chBJSTWO；或者上述chBJSTWOcDNA与含有PAUG1启动子的真核表达载体pMETA组建成胞内表达型表达载体pMETA/chBJSTWO，将重组表达载体pBAD/HisB/chBJSTWO转化入LMG194宿主菌，将重组表达载体pMETαA/chBJSTWO转化入PMAD11酵母工程菌，将重组表达载体pMETA/chBJSTWO转化入PMAD16酵母工程菌；2)用RM作为基础培养基，通过发酵扩增大肠杆菌工程菌LMG194；3)用BMDY作为基础培养基，通过发酵扩增酵母工程菌PMAD11和PMAD16，在表达不同时间加氮源、碳源等营养素；4)大肠杆菌LMG194和酵母菌PMAD16诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即可得到chBJSTWO粗制品，PMAD11表达的chBJSTWO主要以分泌形式存在于培养基中，经过离心取上清即可得到chBJSTWO粗制品；用Ni-NTAArgarose蛋白纯化系统可得到chBJSTWO纯品；5)粗制品或纯品加入甘氨酸等稳定剂和助溶剂后，无菌过滤、分装和冻干后制成成品，保存于-20℃的冷藏环境中。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种重组chBJSTWO蛋白的制备方法。RT-PCR扩增的不同品系鸡BJSTWO的cDNA片段与原核表达载体pBAD/His B、真核表达载体pMETαA和真核表达载体pMETA构建表达质粒pBAD/His B/chBJSTWO、pMETαA/chBJSTWO和pMETA/chBJSTWO，分别转化大肠杆菌LMG194、酵母菌株PMAD11和PMAD16后诱导表达。大肠杆菌和酵母菌PMAD16诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即可得到chBJSTWO粗制品，PMAD11表达的chBJSTWO主要以分泌形式存在于培养基中，经过离心取上清即可得到chBJSTWO粗制品。用Ni-NTA Argarose蛋白纯化系统可以较快的得到chBJSTWO纯品，粗制品或纯品可以作为免疫佐剂、抗病添加剂和疾病治疗药物。本发明具有工艺流程简单，生产成本低，稳定性好，生物学活性高等特点。 |
| 国际公布 |
