公开(公告)号
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CN1680550A
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公开(公告)日
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2005.10.12
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申请(专利)号
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CN200410018835.6
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申请日期
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2004.04.05
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专利名称
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一种重组人尿激酶原的纯化方法
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主分类号
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C12N9/72
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分类号
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C12N9/72;C07K1/14
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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天津天士力制药股份有限公司;上海天士力药业有限公司
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发明(设计)人
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肖成祖;张正光;姜燕;胡显文;胥照平;李世崇;刘健;高丽华
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地址
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300402天津市北辰科技园区新宜白大道辽河东路1号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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代理人
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国省代码
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天津;12
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主权项
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一种重组人尿激酶原的纯化方法,其特征在于该方法包括如下步骤:A.用阳离子交换Streamline-SP扩张床色谱从工程细胞培养上清中回收重组人尿激酶原;B.用SephacrylS-200凝胶色谱进一步纯化上述A收集的尿激酶原粗产品;C.用对氨基苯甲脒-SepharoseFastFlow亲和色谱法除去粗产品中的尿激酶;D.用DEAE-SepharoseFastFlow阴离子交换色谱除去重组人尿激酶原中残留细胞的DNA。
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摘要
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本发明涉及一种重组人尿激酶原的纯化方法,更具体地说是用色谱技术纯化制备重组人尿激酶原的方法。为了解决动物细胞表达的尿激酶原的大规模纯化问题,本发明公开了一种用Streamline-SP扩张床色谱、Sephacryl S-200凝胶色谱、对氨基苯甲脒Sepharose Fast FlowFlow亲和色谱和DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换色谱法,从哺乳动物工程细胞培养液回收基因工程产品的方法。还可以在步骤C和D之间包括步骤E:用阳离子交换Streamline-SP固定床色谱柱浓缩尿激酶原。采用上述方法得到符合SFDA要求的重组人尿激酶原,总回收率在70%以上,纯度达到99%以上。
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国际公布
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