| 公开(公告)号 | CN1660878A |
| 公开(公告)日 | 2005.08.31 |
| 申请(专利)号 | CN200410081443.4 |
| 申请日期 | 2004.12.10 |
| 专利名称 | 一种快速大量提纯质粒DNA的新方法 |
| 主分类号 | C07H21/04 |
| 分类号 | C07H21/04;C07H1/06 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 四川农业大学;王红宁 |
| 发明(设计)人 | 王红宁;汪洋;周生;胡慧琼;余祖华;陈萍 |
| 地址 | 625014四川省雅安市新康路四川农业大学科技管理处 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 四川;51 |
| 主权项 | 一种快速大规模提纯质粒DNA的新方法，其特征材料在于包括：(1)菌体清洗液，组分为0.1mmol/LNaCl，10mmol/LTris-HCl(pH8.0)，1mmol/LEDTA(pH8.0)；(2)菌体重悬缓冲液(R1)，R1的组分为50mmol/L葡萄糖、25mmol/LTris-Cl(pH8.0)，10mmol/LEDTA(pH8.0)，200μgRnaseA；(3)菌体裂解液(R2)，R2的组分为200mmol/LNaOH，1％SDS；(4)裂解中和液(R3)，R3的组分为4mmol/LKAc，pH4.8；(5)异丙醇(R4)，R4的组分为商业分析纯试剂；(6)硅藻土悬液(R5)，R5的组分为5克硅藻土与50ml7mol/盐酸胍混合，取用时摇匀；(7)蛋白洗涤液(R6)，R6的组分为50％乙醇，100mmol/LNaCl，10mmol/LTris-HCl(pH7.5)，5mmol/LEDTA；(8)80％乙醇(R7)，R7的组分为80％的分析纯的乙醇；(9)DNA稀释液(R8)，R8的组分为TE缓冲液(10mmol/LTris-HClpH7.5，1mmol/LEDTA)；(10)另需有若干50--100ml离心管。 |
| 摘要 | 本发明涉及分子生物学研究领域，为一种简易快速大规模提纯质粒DNA的新方法。本方法所用试剂包括菌体清洗液、菌体重悬缓冲液、菌体裂解液、裂解中和液、异丙醇、硅藻土悬液、蛋白洗涤液、80％乙醇、DNA稀释液九种试剂和50ml-100ml离心管。本发明与现有提纯方法比较操作简便，一次提取仅需90分钟。本发明结果稳定，得量高，纯度好，无蛋白质和RNA污染，与应用Qiagen柱式纯化试剂盒和国产赛百盛树脂型试剂盒提取相同的质粒DNA比较，所得DNA的电泳条带同样清晰，无RNA混杂。本发明价格低廉，不需用酚和氯仿等有毒试剂，经放大可用于DNA疫苗的制备。 |
| 国际公布 |
