| 公开(公告)号 | CN1219071C |
| 公开(公告)日 | 2005.09.14 |
| 申请(专利)号 | CN03129701.3 |
| 申请日期 | 2003.05.12 |
| 专利名称 | 两步发酵法生产酵母胞外海藻糖的方法 |
| 主分类号 | C12P19/12 |
| 分类号 | C12P19/12;//(C12P19/12,C12R1:85) |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 天津科技大学 |
| 发明(设计)人 | 肖冬光;赵华;王兰;李于;;郭波 |
| 地址 | 300222 天津市河西区大沽南路1038号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 天津市三利专利商标代理有限公司 |
| 代理人 | 刘莎莉 |
| 国省代码 | 天津;12 |
| 主权项 | 一种两步发酵法生产酵母胞外海藻糖的方法，通常它包括：菌体培养、海藻糖的合成、海藻糖的提取、分离、纯化、浓缩、结晶、干燥，其特征在于：采用两步发酵法利用酵母细胞中的海藻糖合成酶系合成胞外海藻糖，同时钝化酵母的海藻糖分解酶活性，并用混合床离子交换系统分离纯化海藻糖，其具体方法如下：(1)应激态酵母细胞培养：同时采用氮饥饿、热休克和渗透胁迫三种方法，诱导酵母细胞产生较多的应激酶——海藻糖合成酶系，胁迫生长型酵母细胞向应激态酵母细胞的转变；(2)胞外海藻糖的合成：首先采用物理或化学的方法，其中物理方法为加热处理法，化学的方法为甲苯处理法，对应激态酵母细胞进行休克处理；然后采用海藻糖合成培养基进行胞外海藻糖的合成；摇瓶试验为500mL三角瓶，装液量60～120mL，转速100～180r/min；发酵罐试验采用5L自控罐以流加葡萄糖的方式进行胞外海藻糖合成，其生产工艺是：初始装液量2.5L，初始糖浓度为1～2％，pH4.0～7.0，溶氧10％～40％，合成温度40～48℃；反应过程中用10％Na2CO3调节pH，并可根据消耗的糖量补加葡萄糖液，最终反应液量为3L，上述的加热处理法是：在35～43℃振荡培养1h后，升温至45～65℃处理1h，甲苯处理法是：按每克酵母泥加入2～10％甲苯5mL，30～40℃处理1h；(3)海藻糖的分离与纯化：将反应液离心除酵母细胞，取上清液高温灭菌，用截留分子量为10000的中空纤维超滤装置过滤除大分子物质；随后采用混合床离子交换柱分离海藻糖和葡萄糖。 |
| 摘要 | 本发明涉及一种以葡萄糖为基质两步发酵法生产酵母胞外海藻糖的方法，第一步为应激态酵母细胞的培养，采用现有技术的氮饥饿、热休克、渗透胁迫等方法，诱导酵母细胞产生较多的应激酶——海藻糖合成酶系；第二步为应激代谢产物海藻糖的合成，采用物理或化学的方法对应激态酵母细胞进行休克处理，打破酵母细胞膜对海藻糖渗透性的限制，利用酵母细胞中的海藻糖合成酶系大量合成胞外海藻糖。该方法产量高、生产工艺简单、设备投资少、生产成本低，其产品海藻糖对生物大分子具有良好的非特异性保护作用，可广泛应用于分子生物学、医药生物制品、食品及化妆品等领域。 |
| 国际公布 |
