| 公开(公告)号 | CN1212332C |
| 公开(公告)日 | 2005.07.27 |
| 申请(专利)号 | CN03137647.9 |
| 申请日期 | 2003.06.19 |
| 专利名称 | 一种核糖核酸的制备方法 |
| 主分类号 | C07H21/02 |
| 分类号 | C07H21/02 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 威世药业（如皋)有限公司 |
| 发明(设计)人 | 张永深;张燕军 |
| 地址 | 226500 江苏省如皋市普庆路139号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 北京路浩知识产权代理有限公司 |
| 代理人 | 向华 |
| 国省代码 | 江苏;32 |
| 主权项 | 一种核糖核酸的生产方法，其特征在于该方法包括下述步骤：(1)匀浆：取100重量份鲜肝，用水洗净，沥干，用绞肉机绞碎鲜肝，鲜肝与SSCpH7.0溶液以体积/重量计按比例1∶0.8-2.2搅拌混合，胶体磨匀浆，料液离心分离，取上清液，过滤得到70-210体积份的滤液；(2)取步骤(1)的滤液，加入7-21体积份SDS溶液，搅拌，再加入23-100体积份80-90％苯酚溶液，再搅拌，再加入23-100体积份氯仿，搅拌，料液离心分离，回收上清液；(3)取步骤(2)的上清液，加入5-20体积份20％乙酸钾溶液，混匀，再加入80-420体积份乙醇，至乙醇浓度为70％，混匀，自然沉降，离心分离得到沉淀物；(4)用12体积份乙酸钠复溶液溶解步骤(3)的沉淀物，再加入2-11体积份80％苯酚，搅拌，再加入2-11体积份氯仿，搅拌，再离心分离，回收取上清液；(5)取18体积份的步骤(4)的上清液，加入1.8-12体积份80％苯酚，搅拌，再加入1.8-12体积份氯仿，搅拌，离心分离，回收取上清液；(6)取步骤(5)上清液，加入2-14体积份氯仿，搅拌，离心分离，回收取上清液；(7)往步骤(6)的上清液，加入95％乙醇至乙醇浓度为70％，混匀，自然沉淀，倾去上清液，离心分离得RNA粗品；(8)用13体积份K2HPO4溶液溶解上述RNA粗品得到溶解液，然后加入5-10体积份乙二醇甲醚，离心得到上清液；(9)取步骤(8)上清液，再加入5-8体积份乙酸钠溶液，混匀，然后再加入2-4.5体积份加入CTAB溶液，混匀，沉淀，离心，得到沉淀物；(10)取步骤(9)的沉淀物，用10体积份的乙酸钠溶液溶解，再加入95％乙醇至浓度为70％，弃去上清液，沉淀离心分离，重复该步骤3-4次，这样得到RNA产品，其中：所述的SSCpH＝7.0溶液是用5.85克氯化钠、14.7克柠檬酸钠、5克皂土加纯化水至1升后，再用冰醋酸调节到pH＝7.0制备得到的；所述的SDSpH＝9.0溶液是用50克SDS、133毫升TEA、4.0克EDTA加纯水至1升后，再用冰醋酸调节到pH＝9.0制备得到的；所述的80％苯酚溶液是将800毫升苯酚和1克8-羟基喹啉用纯水溶解至1升得到的；所述的乙酸钠复溶液是用13.6克乙酸钠、5.0克SDS、13.3毫升TEA、0.8克EDTA加纯化水至1升后，再用冰醋酸调节到pH＝7.0制备得到的；所述的乙酸钠溶液是用13.6克乙酸钠、0.8克EDTA加纯化水至1升后，再用冰醋酸调节到pH＝7.0制备得到的；所述的K2HPO4溶液是用注射用水溶解296.7克K2HPO4.H2O和0.8克EDTA，再用磷酸调节到pH＝8.0制备得到的；所述的CTBA溶液是用注射用水溶解30克CTBA，再用水调至1升制备得到的。 |
| 摘要 | 本发明涉及一种核糖核酸的制备方法，该方法对现有技术作出了多方面的改进。因此，该方法不但提高了RNA生产效率，而且还能保证产品的质量和得率，显著地降低了生产成本，大大提高了经济效益。 |
| 国际公布 |
