| 公开(公告)号 | CN1212331C |
| 公开(公告)日 | 2005.07.27 |
| 申请(专利)号 | CN03130540.7 |
| 申请日期 | 2003.08.08 |
| 专利名称 | 马铃薯病毒RNA的提取方法 |
| 主分类号 | C07H21/02 |
| 分类号 | C07H21/02;C07H1/08 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 南开大学;天津科润农业科技股份有限公司蔬菜研究所;;所 |
| 发明(设计)人 | 杜荣骞;李德森;罗智敏;俞键;;祁骥 |
| 地址 | 300071 天津市卫津路94号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 天津市学苑有限责任专利代理事务所 |
| 代理人 | 赵尊生 |
| 国省代码 | 天津;12 |
| 主权项 | 一种马铃薯病毒RNA的提取方法，包括马铃薯组织破碎、抽提和沉淀收集病毒核酸以及洗涤和溶解步骤，其特征在于：1)先将马铃薯茎或叶片组织放入冰预冷的灭菌匀浆器或研钵中，研磨成匀浆；2)向匀浆中加入RNA提取缓冲液Tris-HClpH8.0100mmol/L、NaCl100mmol/L、EDTA10mmol/L，还加入β-巯基乙醇，在离心管中振荡混匀；3)加入水饱和酚，氯仿/异戊醇，体积比，49∶1，充分混匀，冰浴中放置10分钟，其间混匀2～3次；4)以10000转/分，室温离心15分钟，吸取水相，水相中加入0.1倍体积的NaAc，3mol/L，pH5.2，和等体积的异丙醇，混匀，在-20℃中沉淀3小时；5)以11000转/分，室温离心20分钟后，弃去上清，加冰预冷70％的乙醇洗涤沉淀2次，室温风干，至乙醇挥发完全为止；6)用无菌双蒸水充分溶解提取的RNA，测OD值，计算RNA浓度。 |
| 摘要 | 本发明涉及一种马铃薯病毒RNA的提取方法。它包括将马铃薯茎或叶片组织放入冰预冷的灭菌匀浆器或研钵中研磨成匀浆，加入提取缓冲液(Tris-HCl pH8.0 100mmol/L，NaCl 100mmol/L，EDTA 10mmol/L)和β-巯基乙醇，混匀，加入水饱和酚，氯仿/异戊醇，室温离心，水相中加入NaAc(3mol/L，pH5.2)和等体积的异丙醇，-20℃中沉淀3小时；70％的乙醇洗涤沉淀，用无菌双蒸馏水充分溶解等步骤。本发明省去了对器皿的高温烘烤或DEPC处理，实验用蒸馏水亦不需DEPC处理。材料的粉碎只需在冰予冷的器皿中进行。全部提取过程均可在常温下进行。所得到的RNA经RT-PCR检测及序列分析，序列完整，没有降解。该技术可用于生产上大规模的马铃薯病毒RT-PCR检测。 |
| 国际公布 |
