公开(公告)号
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CN1641026A
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公开(公告)日
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2005.07.20
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申请(专利)号
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CN200410025834.4
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申请日期
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2004.01.17
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专利名称
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基因工程重组胸腺素α1的制备工艺
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主分类号
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C12N15/16
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分类号
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C12N15/16
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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党化宁
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发明(设计)人
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党化宁
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地址
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710118陕西省西安市高新技术产业开发区长安科技园西部大道66号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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西安新思维专利事务所有限公司
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代理人
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黄秦芳
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国省代码
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陕西;61
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主权项
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基因工程重组胸腺素α1的制备工艺,其特征在于:它它依次包括下述步骤,(1)、重组Tα1基因工程菌的构建:按照大肠杆菌惯用密码子将Tα1的28个氨基酸转化为核苷酸序列,在其基因前依次设计上核酸内切酶EcoRI、蛋氨酸、内切酶BaomHI、天冬酰氨和甘氨酸对应的核苷酸序列;在其基因后依次设计上甘氨酸、核酸内切酶BglII、终止密码子和核酸内切酶PstI对应的核苷酸序列,采用克隆载体酶切后实现基因的串联EcoRIMetBamHIAsnGly——GlyBglIIStopPstIGAATTCATGGGATCCAACGGC——GGCAGATCTTGACTGCAG得到Tα1的n(2-8)串体,分别表示为Tα1①、Tα1②、Tα1③……Tα1其表达载体转化大肠杆菌得到基因工程菌;(2)对基因工程菌进行诱导表达;(3)基因工程菌的培养和高密度发酵;(4)融合蛋白的粗提、纯化和裂解:①所述粗提用高温骤冷方法;②所述纯化是层析方法;③所述裂解是用羟胺法进行裂解,裂解出天然Tα1单体。
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摘要
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本发明涉及基因工程药物生物技术领域,具体涉及基因工程重组胸腺素α1的制备工艺。本发明要克服现有技术存在的成本高、价格昂贵,样品纯化复杂且污染环境的问题。它依次包括下述步骤,(1)重组胸腺素α1基因工程菌的构建:按照大肠杆菌惯用密码子将Tα1的28个氨基酸转化为核苷酸序列,在其基因前依次设计上核酸内切酶EcoRI、蛋氨酸、内切酶BamHI、天冬酰氨和甘氨酸对应的核苷酸序列;在其基因后依次设计上甘氨酸、核酸内切酶BglII、终止密码子和核酸内切酶PstI对应的核苷酸序列,采用酶切后实现基因的串联,得到Tα1的n(2-8)串体;(2)对基因工程菌进行诱导表达;(3)诱导基因工程菌的培养和高密度发酵;(4)融合蛋白的粗提、纯化和裂解;(5)胸腺素α1的纯化。
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国际公布
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