| 公开(公告)号 | CN1641025A |
| 公开(公告)日 | 2005.07.20 |
| 申请(专利)号 | CN200410097557.8 |
| 申请日期 | 2004.11.29 |
| 专利名称 | 真鲷抗菌肽基因和重组酵母表达载体及其制备方法 |
| 主分类号 | C12N15/12 |
| 分类号 | C12N15/12;C12N15/81;C12N15/10;C07K14/46;C12N15/66;C12N15/09;C12P21/02 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 |
| 发明(设计)人 | 陈松林;徐美瑜;隋少飞 |
| 地址 | 266071山东省青岛市南京路106号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 青岛联智专利商标事务所有限公司 |
| 代理人 | 袁和善 |
| 国省代码 | 山东;37 |
| 主权项 | 一种真鲷抗菌肽基因和重组酵母表达载体及制备方法，其特征在于它的真鲷抗菌肽基因的克隆主要包括cDNA文库构建、EST序列测定和DNA序列分析与比对：cDNA文库构建：用TRIzol试剂盒从真鲷脾脏中提取总RNA，用OligotexTM离心柱试剂盒分离Poly-(A)RNA，用pBluescriptIIXRcDNA文库试剂盒构建cDNA文库；EST序列测定：用快速微量制备方法制备质粒DNA，质粒制备在96孔板上完成；用T3定序试剂盒测定cDNA片段的序列，用T3和T7引物从cDNA片段的两端分别进行测序，从而获得全长序列；DNA序列分析与比对：在测定EST序列后，用Cross-Match软件掩盖载体序列，然后将从cDNA文库中获得的序列与美国GENBANK序列数据库中已存的DNA序列进行比对，用PHRAP聚类程序鉴定共同序列和单一序列；用BLASTN和BLASTX程序计算我们获得的cDNA克隆片段与GENBANK序列数据库中已存的DNA序列的同源性。 |
| 摘要 | 一种真鲷抗菌肽基因和重组酵母表达载体及其制备方法，通过文库筛选和EST序列分析，克隆出真鲷抗菌肽(hepcidin)基因，将该基因重组到酵母表达载体pPICZαA，构建成抗菌肽基因表达质粒pPICZ-rsbHEPC1，转化毕赤酵母后，获得了稳定表达真鲷抗菌肽的酵母菌株。细菌生长抑制实验表明重组抗菌肽对大肠杆菌，绿脓杆菌和嗜水气单胞菌等4种细菌均具有剂量依存的抑制活性。本发明首次构建了鱼类抗菌肽(hepcidin)基因酵母表达质粒并研制了重组抗菌肽表达产物，该表达质粒在酵母体内表达稳定，重组抗菌肽分子量小，抑菌活性明显，适宜用作鱼类等水产动物的饲料添加剂。本发明适用于各种鱼类抗菌肽基因克隆和表达载体的构建，生产的基因工程鱼类抗菌肽可作为饲料添加剂，用于鱼类等水产动物的疾病防治。 |
| 国际公布 |
