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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:用人胚肺二倍体细胞培养繁殖脊髓灰质炎病毒的方法专利检索:专利号/专利人/发明人
    

用人胚肺二倍体细胞培养繁殖脊髓灰质炎病毒的方法

公开(公告)号 CN1637140A  
公开(公告)日 2005.07.13  
申请(专利)号 CN200410079584.2  
申请日期 2004.11.26  
专利名称 用人胚二倍体细胞培养繁殖脊髓灰质炎病毒的方法  
主分类号 C12N7/04  
分类号 C12N7/04  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 中国医学科学院医学生物学研究所  
发明(设计)人 胡云章;胡凝珠;刘国栋;瞿素;王荣福  
地址 650118云南省昆明市茭菱路379号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 昆明正原专利代理有限责任公司  
代理人 徐玲菊  
国省代码 云南;53  
主权项 一种用人胚肺二倍体细胞KMB17培养脊髓灰质炎病毒的方法,包括细胞培养、悬浮吸附培养,病毒培养,其特征在于经过下列具体工艺步骤:A、取人胚肺二倍体成纤维细胞KMB17或者人二倍体成纤维细胞2BS的第10~40代,用0.03~0.05%胰蛋白酶+0.02~0.04%乙二胺四乙酸EDTA将单层细胞分散并悬浮于培养液中,接种于容器中,35~37℃静置培养至长成致密单层;B、将长成致密单层的KMB17细胞或者2BS细胞弃营养液,消化后,用含2~5%血清的培养基MEM将细胞收集于另一容器内,记数,按0.03~0.05MOI的量加入脊髓灰质炎病毒毒种,在33±0.5℃下,放入转速为20-120转/分钟的搅拌器上搅拌,进行悬浮吸附0.5~2.0小时;C、将悬浮吸附好的悬液分装于培养瓶内,补加含5%~10%血清浓度的营养液至每个培养瓶并使终体积为100~200ml,于33±0.5℃静置培养20~24小时,换成无血清培养液,培养至90h,细胞出现病变时,即收获细胞并于-20~-30℃冻存,24小时以后化冻,合并样品、检测感染性滴度后,即得生产疫苗用的脊髓灰质炎病毒液。  
摘要 本发明提供一种用人胚肺二倍体细胞KMB17培养脊髓灰质炎病毒的方法,其特征在于取人胚肺二倍体成纤维细胞KMB17或者人二倍体成纤维细胞2BS的第10~40代,并将单层细胞分散并悬浮于培养液中,静置培养至长成致密单层,用含血清的培养基将细胞收集,加入脊髓灰质炎病毒毒种进行悬浮吸附,补加含血清的营养液,静置培养,换成无血清培养液,细胞出现病变时,收获细胞,经冻存、化冻、合并、检测感染性滴度后,得生产疫苗用的脊髓灰质炎病毒液。本发明可使病毒与细胞受体充分接触,有利于病毒进入细胞,同时使细胞处于分裂状态,有利于病毒繁殖,不仅提高了产量,而且显著提高了脊髓灰质炎病毒的滴度,与传统的猴肾原代细胞培养的病毒滴度相比无显著差异(P>0.05)。  
国际公布  
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