公开(公告)号
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CN1206361C
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公开(公告)日
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2005.06.15
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申请(专利)号
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CN99119038.6
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申请日期
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1999.09.10
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专利名称
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系列通用型腺病毒伴随病毒载体的构建及用途
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主分类号
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C12N15/861
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分类号
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C12N15/861;C12N7/01;C12N15/33;C12N15/79;C12N15/65;A61K48/00
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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本元正阳基因技术股份有限公司
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发明(设计)人
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吴小兵;侯云德;伍志坚;曹晖
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地址
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100176 北京市北京经济技术开发区永昌中路 6 号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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代理人
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国省代码
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北京;11
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主权项
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保藏编号为CGMCCNO.0415.1的大肠埃希氏菌DH5α/pWAV-1携带的载体质粒pWAV-1,含有2型AAV(AAV-2)基因组两端的ITR,在两个ITR之间依次为巨细胞病毒立早增强子和启动子、多克隆位点和polyA信号,所述的pWAV-1多克隆位点包括NheI,XhoI,PstI和BamHI。
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摘要
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本发明涉及一系列通用型腺病毒伴随病毒(adeno-associated virus,AAV)载体的构建,这些载体包括pWAV-1、pWAV-2、pSNAV-1和pSNAV-2。其共同特征是每种载体均提供2型AAV两端的ITR、巨细胞病毒(CMV)立早增强子和启动子、多克隆位点和poly A信号。本发明提供了用上述通用型AAV载体构建携带外源基因的AAV载体质粒的方法。含有外源基因的AAV载体质粒既可用于产生重组AAV,又可直接作为真核表达质粒使用。pSNAV-1和pSNAV-2除具有上述共同特征外,还含有新霉素抗性基因表达盒。本发明利用这一特征,提供了用含有外源基因的pSNAV-1或pSNAV-2质粒建立稳定携带AAV载体的细胞株的方法。本发明进一步提供了“一株载体细胞/一株辅助病毒”的重组AAV生产方法,即用我们先前发明的一种用于重组AAV大规模生产的全功能辅助病毒(已申报专利,申请号98120033.8)感染AAV载体细胞株,实现重组AAV的大规模生产。
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国际公布
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