| 公开(公告)号 | CN1206349C |
| 公开(公告)日 | 2005.06.15 |
| 申请(专利)号 | CN02150920.4 |
| 申请日期 | 2002.11.28 |
| 专利名称 | 海藻中提取铁超氧化物歧化酶的方法 |
| 主分类号 | C12N9/08 |
| 分类号 | C12N9/08;C07K1/14;C07K1/36 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 浙江大学 |
| 发明(设计)人 | 龚兴国;曾冬云;周远 |
| 地址 | 310027 浙江省杭州市西湖区玉古路20号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 杭州求是专利事务所有限公司 |
| 代理人 | 韩介梅 |
| 国省代码 | 浙江;33 |
| 主权项 | 海藻中提取含铁超氧化物歧化酶的方法，其特征是包括以下步骤：1)取新鲜海藻以1∶2～3的重量体积比加入pH值7～8、浓度为50～100mmol/L、含0.5mmol/LEDTA的磷酸缓冲液，将混和液进行超声破碎，破碎液离心，取上清；2)将上清在50℃～55℃水浴中不断搅拌，进行热变性处理，去杂蛋白；3)离心步骤2)所得上清液，加入(NH4)2SO4至饱和浓度40～50％，静置6小时以上，再离心、取上清，在上清液中加(NH4)2SO4至饱和浓度85％，静置6小时以上，离心、取沉淀；4)取步骤3)所得沉淀，用pH值7～8，浓度为10mmol/L，含0.5mmol/LEDTA的磷酸缓冲液溶解，上SephadexG-25脱盐柱，用自动收集器收集酶活性部分；5)将步骤4)收集的酶活性部分上阴离子DEAE-SepharoseFastFlow交换层析柱，用pH7.0～8.0，浓度为10mmol/L含0.5mmol/LEDTA的磷酸缓冲溶液作梯度洗脱，盐梯度为0～0.8mol/LNaCl，收集酶活性部分；6)将步骤5)收集的酶活性部分经透析后上阳离子CM-SepharoseFastFlow交换层析柱，用pH值5.0～5.8，浓度为2.5mmol/L、含0.5mmol/LEDTA的醋酸缓冲溶液作梯度洗脱，盐梯度为0～0.8mol/LNaCl，流速控制在12ml/min，再收集酶活性部分；7)将步骤6)收集的活性部分上分子筛SephadexG-100/SephadexG75柱，用pH值7～8，浓度为10mmol/L含0.5mmol/LEDTA的磷酸缓冲液洗脱，收集活性峰，活性峰用双蒸水透析，透析完全得样品溶液，用聚乙二醇20000浓缩，冻干，即得含铁超氧化物歧化酶。 |
| 摘要 | 本发明公开了从海藻中提取铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)的方法。由于该方法是从天然材料中提取铁超氧化物歧化酶，海藻原料充足，不存在紧缺现象，同时材料成本相对于提取产品来说也是十分低廉。得到的产品比活相当高，活力损失相对较小，可以满足一般的医药需求，并且符合当代人“崇尚自然，回归自然”的心理需求，不存在转基因生产导致的基因污染问题。工艺中采用了DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-Sepharose Fast Flow两种层析材料，其特点是流速快、可大量分离样品，同时可反复再生利用，能实现大规模工业化生产。 |
| 国际公布 |
