公开(公告)号
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CN1616096A
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公开(公告)日
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2005.05.18
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申请(专利)号
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CN200410040721.1
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申请日期
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2004.09.16
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专利名称
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减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法
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主分类号
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A61K39/13
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分类号
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A61K39/13;A61P31/14;C12N7/00
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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中国医学科学院医学生物学研究所
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发明(设计)人
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褚嘉祐;姜述德;廖国阳;孙明波;李卫东;张丽旌;谢忠平;俞泳霆
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地址
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650118云南省昆明市茭菱路379号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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昆明正原专利代理有限责任公司
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代理人
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徐玲菊
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国省代码
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云南;53
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主权项
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一种减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法,其特征在于它经过下列工艺步骤:1)、三级放大细胞培养:a、首先对细胞种子进行离心清洗,按最低需求培养液(MEM)∶Vero细胞种子=500-1000∶1的比例,接种到5-10升小容量发酵罐中进行细胞培养,控制培养温度35-37℃.pH7.0-7.4,溶解氧30-50%,并于培养第三天开始灌流,灌流量按细胞生长情况由1升/天最终增加到5升/天,培养5-7天,使细胞增殖至1-3×106个细胞/毫升,进行胰酶消化;b、将a步骤胰酶消化过的细胞悬液,按最低需求培养液(MEM)∶Vero细胞种子=500-1000∶1的比例,接种于50-85升中容量发酵罐中培养,控制培养温度35-37℃,pH7.0-7.4,溶解氧30-50%,在再循环培养液体积为50-100升条件下,于第三天开始进行再循环培养,培养5-7天,使细胞密度达1-3×106个细胞/毫升,进行胰酶消化;c、将b步骤胰酶消化过的细胞悬液,按最低需求培养液(MEM)∶Vero细胞种子=500-1000∶1的比例,接种于300-550升大容量发酵罐中培养,控制培养温度35-37℃,pH7.0-7.4,溶解氧30-50%,培养5-7天,使细胞密度为1-3×106个细胞/毫升;2)、病毒培养:收获c步骤的细胞培养液,用M199洗细胞一次,加入M199培养液,按病毒∶细胞=0.01-0.1∶1的比例,接种脊髓灰质炎减毒株病毒,进行病毒培养,控制培养温度32-34℃,pH7.0-7.4,溶解氧20-30%,培养48-96小时,收获病毒液。
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摘要
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本发明提供一种减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗培养方法,采用Vero细胞、脊髓灰质炎减毒株病毒,在发酵罐中进行培养,通过细胞培养规模的三级放大,使细胞培养面积相当于21000个1升玻璃瓶静置培养的面积,且细胞产量是常规1升瓶静置培养的21000倍,常规10升转瓶培养的2100倍,既减少了培养空间,又降低了培养液用量,同时也减少了劳动力投入,短时间内即可实现大规模制备细胞及病毒液,满足脊髓灰质炎灭活疫苗对大量病毒抗原的需求。另用本发明生产的病毒液制备成疫苗后,质量稳定可靠,安全性及免疫原性良好,经检定全部符合国家生物制品规程的要求。
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国际公布
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