| 公开(公告)号 | CN1616653A |
| 公开(公告)日 | 2005.05.18 |
| 申请(专利)号 | CN200410092831.2 |
| 申请日期 | 2004.11.12 |
| 专利名称 | 筛选转基因动物细胞阳性单克隆方法 |
| 主分类号 | C12N5/10 |
| 分类号 | C12N5/10;C12Q1/04 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | 2004.9.20 CN 200410083047.5 |
| 申请(专利权)人 | 新疆金牛生物股份有限公司 |
| 发明(设计)人 | 王亮;朱海;吕自力;刘婷婷;帅志强;彭涛 |
| 地址 | 830026新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市经济技术开发区校院路15号金牛公司科学院 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 乌鲁木齐合纵专利事务所 |
| 代理人 | 汤建武 |
| 国省代码 | 新疆;65 |
| 主权项 | 一种筛选转基因动物细胞阳性单克隆方法，其特征在于按下述步骤进行：第一步，在培养液中对需要转基因的动物细胞进行培养，待其动物细胞聚合至40％至80％后，进行基因转染；第二步，在基因转染后进行1天至7天的动物细胞生长恢复，然后用能致死非基因转染动物细胞的浓度的新霉素进行5天至20天筛选；第三步，在第二步致死性筛选后，使用转基因动物细胞维持生长浓度的新霉素，再加入离心收集的该动物细胞对数生长期含有生长因子培养液，在此条件下，在培养液中进行2天至14天的动物细胞培养扩增；第四步，当第三步中的阳性转基因动物细胞生长形成克隆后，用细胞刮刀刮除正常细胞，保留转基因阳性动物细胞克隆；第五步，挑选和标记选定的转基因动物细胞阳性单克隆，用0.125％至0.25％胰酶或EDTA-胰酶定点消化该单克隆细胞并将消化后的阳性单克隆细胞迅速置入新的培养器皿中培养扩增，培养扩增至50％--80％的细胞聚合，用0.125％至0.25％浓度的胰酶或EDTA-胰酶消化和悬浮上述所培养扩增的阳性转基因单克隆动物细胞，加入培养液和致死非基因转染动物细胞的浓度的新霉素，继续培养细胞，在致死非基因转染动物细胞的浓度的新霉素和胰酶或EDTA-胰酶作用下，在培养液中致死残留的非基因转染动物细胞；第六步，将第五步所得到阳性单克隆动物细胞再植入新的培养器皿中培养，在阳性转基因动物细胞维持生长的浓度的新霉素条件下，再加入离心收集的该细胞对数生长期含有生长因子培养液的条件下，即可得到大量的纯化的转基因阳性单克隆动物细胞。 |
| 摘要 | 一种筛选转基因动物细胞阳性单克隆方法，其按下述步骤进行：第一步，对需要转基因的动物细胞进行培养，并进行基因转染；第二步，用能致死非基因转染动物细胞的浓度的新霉素进行筛选；第三步，转基因动物细胞阳性克隆的培养扩增；第四步，刮除非基因转染动物细胞，保留转基因动物细胞阳性克隆；第五步，挑选转基因动物细胞阳性单克隆并培养扩增，致死残留的非基因转染动物细胞；第六步，进一步培养扩增得到大量的转基因动物阳性单克隆细胞。本发明的特点：省时省工，效率高，并且大大降低了筛选转基因动物细胞阳性单克隆的成本。同时该方法适用于商业上具有经济价值的转基因动物细胞阳性单克隆的筛选，是制作转基因动物的必要手段之一。 |
| 国际公布 |
