寡核苷酸芯片及其在乙型肝炎病毒突变位点检测中的应用

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公开(公告)号

CN1200115C

公开(公告)日

2005.05.04

申请(专利)号

CN02135625.4

申请日期

2002.10.14

专利名称

寡核苷酸芯片及其在乙型肝炎病毒突变位点检测中的应用

主分类号

C12Q1/68

分类号

C12Q1/68

分案原申请号

优先权

申请(专利权)人

山东省医药生物技术研究中心

发明(设计)人

鲁艳芹;韩金祥

地址

250062 山东省济南市经十路89号

颁证日

国际申请

进入国家日期

专利代理机构

济南三达专利事务所

代理人

孙君

国省代码

山东;37

主权项

一种寡核苷酸芯片，包括玻璃基片和阵列式分布的寡核苷酸探针与对照的点涂层，所述的点涂层是在玻璃基片上均匀分布的、含有包括乙肝前核心抗原区和表面抗原区已知的12个突变位点和其相对应的野生位点的72条寡核苷酸探针，其特征在于，所述的72条寡核苷酸探针包含的12个突变位点是，乙肝表面抗原区已知的5个突变位点：546C-T、551A-G、552T-C、585A-C、587G-A；前核心抗原区7个已知的突变位点：1896G-A、1762A-T与1764G-A联合突变、1858C-T、1862G-T、1898G-A、1899G-A、1901G-A；所述寡核苷酸探针所在阵列与对照的点涂层的大小，可以根据点的大小，点间距的变化而变化，阵列的排列和分布数量可以根据待分析样品的数目而变化；所述寡核苷酸探针点直径为100μm，点间距为300μm，寡核苷酸探针所在阵列与对照点涂层大小为2.2mm×2.5mm；上述72条寡核苷酸探针序列如下：

位点

编号

探针序列

长度

Tm值

GC％

546

5′NH2-(CH2)6-T15-ACTCCTGCTCAAGGAA3′

66.9

5′NH2-(CH2)6-T15-ACTCCTGCTCAAGGAAC3′

52.9

5′NH2-(CH2)6-T15-ACTCCTGCTCAAGGAAT3′

67.6

47.1

5′NH2-(CH2)6-T15-AAGAGGGAAACATAGAG3′

65.1

41.2

5′NH2-(CH2)6-T15-AAGAGGGAAACATAGAGG3′

68.1

44.4

5′NH2-(CH2)6-T15-AAGAGGGAAACATAGAGA3′

65.8

38.9

551

5′NH2-(CH2)6-T15-TGCTCAAGGAACCTCT3′

66.9

摘要

寡核苷酸芯片及其在乙型肝炎病毒突变位点检测中的应用，属于基因芯片技术领域。本发明的寡核苷酸检测芯片，包括玻璃基片和阵列式分布的寡核苷酸探针与对照的点涂层，所述的寡核苷酸探针共72条，包含有乙肝前核心抗原区和表面抗原区已知的12个突变位点和其相对应的野生位点。以玻璃基片上的寡核苷酸探针作为固相引物，乙肝病毒DNA作为模板，三对液相引物混合后，通过荧光标记的Cy3-dCTP进行固相PCR扩增。根据寡核苷酸芯片上不同位点荧光信号的强弱来分析突变位点。本发明集寡核苷酸芯片和固相PCR于一体，具有快速、高效、准确、平行诊断的特点。

国际公布

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