| 公开(公告)号 | CN1609231A |
| 公开(公告)日 | 2005.04.27 |
| 申请(专利)号 | CN03132205.0 |
| 申请日期 | 2003.10.22 |
| 专利名称 | 中药材gDNA种质特异性微阵列芯片制备方法 |
| 主分类号 | C12Q1/68 |
| 分类号 | C12Q1/68 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 李同祥;王进科;陆祖宏;南京新益华集团有限公司 |
| 发明(设计)人 | 李同祥;王进科;陆祖宏 |
| 地址 | 210096江苏省南京市四牌楼2号东南大学分子与生物分子实验室 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 江苏;32 |
| 主权项 | 中药材gDNA种质特异性微阵列芯片制备方法，其特征在于该制备方法包括如下步骤：(a)提取各样本的gDNA，用识别4个碱基的平头末端酶酶切，酶切产物为平头末端，理论上每44即256个碱基就有一个酶切位点，其酶切片段大小在150-500bp之间。(b)通过抑制性差减杂交(SSH)对在一个样本(设其为Tester即试验者)中存在而在另一样本(设其为Driver即躯赶者)中不存在的差异gDNA片段进行PCR扩增富集。(c)PCR产物用T-vecter克隆转化大肠杆菌，挑取白色重组子克隆，挑取的克隆转入96孔培养板培养。取0.5μl培养菌液，用5′端修饰有氨基的nestedPCRprimer1(图1(4))和nestedPCRprimer2(图1(5))在96微孔板中扩增差异克隆。(d)gDNA用识别4个碱基的平头末端酶酶切后，连接接头adaptor3，用引物primer3扩增时掺入dCTP-Cy3或dCTP-Cy5进行标记的扩增子其PCR产物直接用于杂交筛选。(e)将所有差异克隆用点样仪点样于硅烷化处理的玻片上，在一定条件下分别用荧光标记的不同样本扩增子(amplicons)杂交，用激光扫描仪进行扫描检测，筛选获取种质特异性探针。(f)将获得的所有种质特异性探针制作成微阵列。 |
| 摘要 | 中药材gDNA种质特异性微阵列芯片制备方法是以名贵中药材(石斛)为材料，提取其不同品种gDNA，用识别4个碱基的(如RsaI酶)酶切，酶切产物为平头末端，通过抑制性差减杂交(SSH)，获取不同种间差异克隆片段并点样于玻片，采用dCTP-Cy3和dCTP-Cy5标记的gDNA扩增子与其杂交筛选到种质特异性探针，以这些大量的探针制备成可用于平行检别多个品种及真、伪的中药种质鉴定芯片。本发明以gDNA为鉴别的信息载体，在基因组(gDNA)水平上寻找获得种质特异性探针制备低成本、高通量、平行鉴别多种及真伪的中药种质鉴定芯片。获得的大量种质特异性探针，对中药的基因组特征研究及探索中药的遗传进化和生物学分类提供大量的信息，对于建立中药材种间、真伪鉴别系统基因库标准基因图谱具有非常重要的价值，同时，为道地药材和非道地药材质量差异的研究，以及优质中药材种质的筛选和育种栽培研究提供技术支撑，对中药的高通量鉴定，实现中药质量控制，促进中药现代化有广泛的应用价值。 |
| 国际公布 |
