公开(公告)号
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CN1196782C
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公开(公告)日
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2005.04.13
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申请(专利)号
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CN01106417.X
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申请日期
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2001.01.08
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专利名称
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一种磷酯酶制剂的制备方法
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主分类号
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C12N9/16
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分类号
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C12N9/16;C12N1/20;//(C12N9/16,C2R1:01)
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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中国科学院武汉病毒研究所
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发明(设计)人
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陈涛;孙松柏;宋建华
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地址
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430071 湖北省武汉市武昌小洪山
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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武汉宇晨专利事务所
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代理人
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王敏锋
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国省代码
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湖北;42
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主权项
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一种磷酯酶C制剂的制备方法,采用磷酯酶C单胞菌属CW-W-90-3菌株,其特征是:A、菌种活化,将无菌水滴入菌种的冻干管中,混匀,再将菌种接在牛肉膏0.3%、蛋白胨1%、葡萄糖0.5%、NaCl0.5%的固体培养基上进行活化培养;B、种子液的培养,将菌种接装有液体培养基的种子罐中培养,pH值6.5-8.0,温度25-37℃,时间8-12小时,搅拌速度200-240r/m;C、发酵液的培养,将种子液接入发酵罐中,其培养基同种子液培养基,接种量5-10%,通气量1∶0.3-0.5,高压0.05Mpa;D、纯化,将发酵液经4000r/m离心,弃去沉淀,收集上清液,经30-80%(NH4)2SO4分级沉淀,再经蒸馏水溶解,离心去杂质,脱盐、浓缩;E、冷冻干燥,将精酶泥用蒸馏水调至含干物质10%,并加入辅料脱脂奶粉3%,在0.05Mpa以下真空环境,-40℃冷冻4小时,再升华到0℃维持10小时,最后升温到25℃,干燥6小时。
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摘要
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本发明公开了一种磷酯酶制剂的制备方法,首先是菌种活化,将无菌水滴入菌体的冻干管中混匀,再将菌种接在固体培养基上进行活化培养;其次是种子液的培养,将菌种接在装有液体培养基的种子罐中培养;再次是发酵液的培养,将种子液接入发酵罐中培养,接种量5~10%,通气量1∶0.3~0.5,高压0.05MPa;第四是纯化,将发酵液离心,弃去沉淀,收集上清液,分级沉淀;第五是冷冻干燥。本发明方法易行,工艺简便,酶冻干粉活力单位2000~4000u/g,具有抗血小板聚集的功能,制剂稳定性好,适合于大批量生产。
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国际公布
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