| 公开(公告)号 | CN1603405A |
| 公开(公告)日 | 2005.04.06 |
| 申请(专利)号 | CN03134768.1 |
| 申请日期 | 2003.09.29 |
| 专利名称 | 高纯度蚓激酶的制备方法及由其制备的药物制剂 |
| 主分类号 | C12N9/48 |
| 分类号 | C12N9/48;A61K38/48;A61P7/02 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 北京赛生药业有限公司 |
| 发明(设计)人 | 马骉;魏化伟;吴丹;宋梦薇;张颖 |
| 地址 | 100078北京市经济技术开发区兴盛街8号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 北京律诚同业知识产权代理有限公司 |
| 代理人 | 徐金国;梁挥 |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | 一种高纯度蚓激酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)蚓激酶粗品的提取：取鲜活蚯蚓用水洗净，加入食盐处理；加入pH6.8～8.3的缓冲液，用胶体磨制备匀浆；将匀浆液反复冻融；将匀浆液加热，去除对热不稳定的杂蛋白；将匀浆液离心，取上清液；上清液经超滤浓缩，截留分子量为10000～50000道尔顿的组分，冷冻干燥制得蚓激酶粗品；(2)蚓激酶粗品的纯化：将步骤(1)中获得的蚓激酶粗品溶于缓冲液中，离心，取上清液用离子交换层析柱分离，得到蚓激酶活性组分；(3)蚓激酶活性组分的再纯化：将步骤(2)中的蚓激酶活性组分用亲和层析平衡缓冲液溶解，用单克隆抗体亲合层析柱进行再纯化，用缓冲液平衡至流出液在蛋白检测仪上绘出稳定的基线后，再用含有洗脱剂的亲和层析洗脱液洗脱，收集活性洗脱峰，冷冻干燥得到高纯度的蚓激酶。 |
| 摘要 | 本发明公开一种高纯度蚓激酶的制备方法及以其为原料药的制剂。本发明通过采用单克隆抗体技术实现蚓激酶活性组分的再纯化，从而得到高纯度蚓激酶，该方法的特点是所获酶的专一性强，活性高，达到每毫克蛋白20万单位以上；经高效液相色谱测试为单一组分；在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈现一条带，分子量为32000±2000道尔顿；氨基酸序列分析，N-末端10个氨基酸序列为：Ile-Val-Gly-Gly-Ile-Glu-Ala-Arg-Pro-Tyr，以所述高纯度蚓激酶为原料药可以制成可供口服、肌注、以及静脉注射与静脉输液多种途径给药的制剂，用于血栓性疾病的治疗。 |
| 国际公布 |
