公开(公告)号 | CN1195069C |
公开(公告)日 | 2005.03.30 |
申请(专利)号 | CN02138677.3 |
申请日期 | 2002.11.28 |
专利名称 | 人卵泡刺激素β亚基单克隆抗体的制备方法 |
主分类号 | C12P21/08 |
分类号 | C12P21/08 |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 南京医科大学 |
发明(设计)人 | 卞倩;管晓虹;宋玲;仇镇宁 |
地址 | 210029 江苏省南京市汉中路140号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 南京苏高专利事务所 |
代理人 | 柏尚春 |
国省代码 | 江苏;32 |
主权项 | 一种人卵泡刺激素β亚基单克隆抗体的制备方法,其特征在于其方法为:1.1制备免疫原:以人工合成的FSHβ多肽片段为免疫原,其氨基酸序列为YTRDLVYKNP,将其滴在硝酸纤维素膜上;1.2免疫:按常规外科操作将硝酸纤维膜埋入待免疫的小鼠脾内,间隔两周后加强免疫,腹腔注射抗原肽与福氏不完全佐剂混合液,第三次免疫起每次免疫间隔3周至1个月;1.3筛选:用酶联免疫吸附法筛选免疫鼠血清;1.4细胞融合、筛选及克隆化:选抗血清效价最高的鼠取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合,经三次亚克隆获得稳定分泌抗FSHβ的单克隆抗体细胞株;1.5单克隆抗体的提取与纯化:将以上的细胞株体外扩大培养后,定期收集上清液以盐析法纯化;1.6腹水制备:将扩大培养后的细胞株打入老龄鼠腹腔以生产大量腹水,经提取、纯化后即可得到FSHβ亚基单克隆抗体。 |
摘要 | 本发明公开了一种人卵泡刺激素β亚基单克隆抗体的制备方法,其方法为:①制备免疫原:以人工合成的FSH β多肽片段为免疫原,将其滴在硝酸纤维素膜上;②免疫:将硝酸纤维膜埋入待免疫的小鼠脾内,间隔两周后加强免疫,第三次免疫起每次免疫间隔3周至1个月;③筛选:用酶联免疫吸附法筛选免疫鼠血清;④细胞融合、筛选及克隆化;⑤单克隆抗体的提取与纯化;⑥腹水制备;人卵泡刺激素β亚基单克隆抗体的制备方法是一种应用单克隆抗体制备技术,以人工合成的多肽——人卵泡刺激素的一个组成单位,β亚基的氨基酸片段——为免疫原制备得到灵敏性高、特异性强、实用性好的鼠源性抗人卵泡刺激素β亚基单克隆抗体。 |
国际公布 |