| 公开(公告)号 | CN1188516C |
| 公开(公告)日 | 2005.02.09 |
| 申请(专利)号 | CN99119166.8 |
| 申请日期 | 1999.09.17 |
| 专利名称 | 一种重组纳豆激酶的编码核苷酸序列及该酶的制备方法 |
| 主分类号 | C12N9/12 |
| 分类号 | C12N9/12;C12N15/70;C12N15/54;A61K38/45;A61P7/02 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 常荣山 |
| 发明(设计)人 | 常荣山 |
| 地址 | 100080 北京市海淀区苏州街18号长远天地A2座612室 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | 一种制备重组纳豆激酶的方法，包括纳豆激酶基因克隆的构建，在大肠杆菌中的表达，工程菌的发酵，表达产物重组纳豆激酶的纯化以及其生物活性的测定，其特征在于：(1)以枯草杆菌BacillussubtilisnottoAsl.1086菌体总DNA为模板，参考枯草杆菌中编码纳豆激酶EC.3.4.262的NAT基因序列设计引物，通过PCR方法直接扩增纳豆激酶基因，纳豆激酶基因克隆进pGEM-T载体后，经序列分析证实，然后与含有cIta857基因，PrPL启动子以及rrnB基因转录终止信号的原核表达载体pBV220质粒组装成高效表达载体pBV-NK；(2)pBV-NK转化大肠杆菌BL21-DE3，用温度诱导重组纳豆激酶基因的表达，表达产物以包涵体的形式存在于大肠杆菌BL21-DE3中；(3)通过发酵技术大规模培养大肠杆菌BL21-DE3，用温度诱导重组纳豆激酶基因表达，发酵参数为温度28℃-40℃，溶氧量为50％-80％，PH6-8；(4)发酵后用高压破碎细菌，离心收集破碎后的沉淀，将包涵体变性后，经凝胶过滤纯化包涵体，包涵体复性后，经离子交换法纯化重组纳豆激酶，进行活性测定后，冻干成粉末保存。 |
| 摘要 | 纳豆激酶是一种安全，高效的具有纤溶活性的酶制剂。目前已被深入研究，试图作为口服溶栓剂予以开发应用。我们利用基因工程的方法，表达出具有纤溶活性的纳豆激酶。重组产物和天然纳豆激酶相比，具有良好的生物学活性。体内和体外实验证明，纳豆激酶具有良好的溶解血栓作用和促进内源性t-PA的产生，从而直接和间接的促进了溶栓作用。同时由于纳豆激酶的安全性较高，没有出现大出血等现象，易于口服治疗。 |
| 国际公布 |
