单个核细胞白细胞相容性抗原A和B特异核糖核酸检测方法
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公开(公告)号
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CN1570147A
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公开(公告)日
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2005.01.26
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申请(专利)号
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CN200410024074.5
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申请日期
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2004.05.08
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专利名称
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单个核细胞白细胞相容性抗原A和B特异核糖核酸检测方法
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主分类号
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C12Q1/68
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分类号
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C12Q1/68
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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山东大学齐鲁医院
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发明(设计)人
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邹雄;张义;杨晓静
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地址
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250012山东省济南市历下区文化西路107号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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山东济南齐鲁科技专利事务所有限公司
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代理人
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宋永丽
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国省代码
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山东;37
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主权项
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单个核细胞白细胞相容性抗原A和B特异核糖核酸检测方法，首先抽取外周血，提取淋巴细胞(PBL)，然后对淋巴细胞总RNA进行鉴定，当可见5s，18s，28s，三条清晰条带时，可用于逆转录聚合酶链反应，其特征在于：使逆转录聚合酶链反应体系为25ul，其中逆转录酶1ul，随机引物1ul，Taq酶0.2ul，上下游引物各是0.4ul，其中HLA-B和HLA-A引物均是4对，使用其中任何一对均可，其中RNA是10ul，得出多聚酶链反应参数是42℃30min，95℃3min，94℃1min，55℃1min，72℃1min，5个循环，94℃10sec，60℃40sec，40个循环，72℃5min，对扩增产物电泳扫描及序列分析，最后进行荧光定量检测，即：以引物为基础合成荧光探针，建立荧光定量逆转录聚合酶链反应，获得检测结果。
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摘要
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本发明是单个核细胞白细胞相容性抗原A和B特异核糖核酸检测方法，一、外周血淋巴细胞(PBL)的提取，二、外周血淋巴细胞总RNA的鉴定，三、优化后的聚合酶链反应(PCR)扩增体系，四、扩增产物的电泳扫描及序列分析，五、荧光定量检测。采用本发明检测方法，检测结果是用1-2％琼脂糖凝胶电泳，正常人在287bp处可见明显亮带，免疫力低的人群则明显减弱或缺失，以此结果，可以判断是否是肿瘤患者，若是肿瘤患者筛选生物治疗的药物或治疗方法，可以提高肿瘤患者针对性的治疗效果，对尚未有临床症状的人群，提供应当增强免疫力的警示，对研究人员可以提供寻求提高细胞免疫力的中草药等。本发明可以普遍应用于健康查体。
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国际公布
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