| 公开(公告)号 | CN1181207C |
| 公开(公告)日 | 2004.12.22 |
| 申请(专利)号 | CN01124108.X |
| 申请日期 | 2001.08.13 |
| 专利名称 | 细胞培养生产新疆雪莲总黄酮的方法 |
| 主分类号 | C12P17/06 |
| 分类号 | C12P17/06;C12N5/04;A01H4/00 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 沈阳联美植物细胞工程有限公司 |
| 发明(设计)人 | 贾景明;张剑侠;吴立军 |
| 地址 | 110179 辽宁省沈阳市浑南高新技术产业开发区21世纪大厦1709房间 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 北京太兆天元知识产权代理有限责任公司 |
| 代理人 | 张韬 |
| 国省代码 | 辽宁;21 |
| 主权项 | 一种新疆雪莲总黄酮的制备方法，其特征在于该方法为：以新疆雪莲高产细胞株作为种子，种子的保藏号是CGMCC 0610，采用气升式细胞反应器作种子罐，培养10-15天，培养条件为：温度22-26℃，光照时间为8小时/天，光照强度800-2000LX；以气升式细胞反应器作为生产罐；培养条件为培养温度24±1℃，光照8h/d，光照强度1000LX，培养时间10-15天；其培养基采用MS培养基，并添加萘乙酸0-3.5mg/L，6-苄基嘌呤0-3.0mg/L，蔗糖1.5-2.5％，并调PH值4.5-7.5；细胞培养液下罐后，将雪莲培养品60℃减压干燥至恒重，研磨成粉，取粉末1.0重量份，置100体积份容器，加100体积甲醇，即其中称取的雪莲培养品与所用甲醇的配比是1.0克雪莲粉：100毫升甲醇，放置24小时，超声萃取40分钟，滤过，回收甲醇，残渣加适量水3～5体积份使溶解，难溶部分超声溶解，放冷；通过60～85目、10g、内径1cm、长度15cm的聚酰胺层析柱，湿法装柱；以水50体积份洗脱，弃去水液，再用50％乙醇100体积份洗脱，收集洗脱液，并定容至100体积份，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，弃去初滤液，取续滤液，上色谱柱，以40∶60∶1.0的甲醇∶水∶冰醋酸为流动相；检测波长257nm，流量1.0ml/min，灵敏度0.02AUFS，柱温室温，进样量10μl，进行分离，收集获得总黄酮晶体。 |
| 摘要 | 本发明提供了一种采用气升式生物反应器大规模培养新疆雪莲，从培养液中分离提取新疆雪莲总黄酮的方法。该方法是在MS培养基上培养发酵的种子，再将种子转移到20L生物反应器中进行大规模培养。然后对反应器中的培养液进行分离、纯化获取新疆雪莲总黄酮7.1％，纯度99％本发明方法生产成本低，不污染环境，达到了产业化水平。 |
| 国际公布 |
