| 公开(公告)号 | CN1554770A |
| 公开(公告)日 | 2004.12.15 |
| 申请(专利)号 | CN200310106227.6 |
| 申请日期 | 2003.11.07 |
| 专利名称 | 含CpG DNA畜禽疫苗佐剂的PCR制备方法 |
| 主分类号 | C12P19/34 |
| 分类号 | C12P19/34;A61K39/39 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 深圳市未来海洋科技发展有限公司 |
| 发明(设计)人 | 朱鸿飞;李光富 |
| 地址 | 210096广东省深圳市中心区福中一路江苏大厦30楼45号信箱 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 南京经纬专利商标代理有限公司 |
| 代理人 | 王之梓 |
| 国省代码 | 广东;44 |
| 主权项 | 一种能促进畜禽疫苗效价的含CpGDNA畜禽疫苗佐剂的PCR制备方法，其特征在于：第一步：基因工程重组质粒的制备：根据由序列为：5’----GGTGCATCGATGCAGGGGGG---3’、5’----GGTGCGTCGATGCAGGGGGG---3’及5’---TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT---3’串联而成的D19D282006目的片段DNA的序列，合成其寡核苷酸正链和负链，在合成的寡核苷酸末端加上能与线性载体末端相匹配的碱基序列，然后将此寡核苷酸片段、退火缓冲液、及无菌重蒸水混合后，于90℃～100℃水浴中孵浴3分钟以上，自然冷却至室温，形成含CpG基序的目的片段，此后将此DNA片段插入线性载体的相应的酶切位点，最后，将其转化感受态大肠杆菌而得到的基因工程重组质粒；第二步：根据目的片段两端的重组质粒DNA序列，设计特异引物；第三步：以重组质粒为模板，加入特异引物，并进行三温循环的PCR扩增，具体参数为：92℃～98℃预变性5～10分钟；92℃～98℃，45～60秒，50～58℃，45～60秒，72℃，45～60秒，进行30～35个循环；最后在72℃延伸10分钟。 |
| 摘要 | 含CpG DNA畜禽疫苗佐剂的PCR制备方法，据由序列为：5’-GGTGCATCGATGCAGGGGGG-3’、5’-GGTGCGTCGATGCAGGGGGG-3’及5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’串联而成的D19D282006 DNA片段的序列，合成其正链和负链，在合成的寡核苷酸末端加能与载体末端匹配的碱基，将此寡核苷酸片段、退火缓冲液、无菌重蒸水混合后，于90℃～100℃水浴中3分钟以上，冷却至室温，形成含CpG基序的目的片段，将DNA片段插入载体相应的酶切位点，并将其转化感受态大肠杆菌得到重组质粒；据目的片段两端的重组质粒DNA序列，设计特异引物；以重组质粒为模板，加入特异引物，进行三温循环PCR扩增，具体参数为：92℃～98℃预变性5～10分钟；92℃～98℃，45～60秒，50～58℃，45～60秒，72℃，45～60秒，进行30～35个循环；最后在72℃延伸10分钟。 |
| 国际公布 |
