| 公开(公告)号 | CN1552890A |
| 公开(公告)日 | 2004.12.08 |
| 申请(专利)号 | CN200310112672.3 |
| 申请日期 | 2003.12.18 |
| 专利名称 | 结缔组织生长因子C区抗原的制备方法 |
| 主分类号 | C12P21/00 |
| 分类号 | C12P21/00;C12P19/34 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 东南大学 |
| 发明(设计)人 | 刘乃丰;吴国球 |
| 地址 | 210096江苏省南京市四牌楼2号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 南京经纬专利商标代理有限公司 |
| 代理人 | 王之梓 |
| 国省代码 | 江苏;32 |
| 主权项 |
一种结缔组织生长因子C区抗原的制备方法，其特征在于第一步：用NheI和XbaI酶对pCOMB3载体进行双酶切，切除两酶切位点NheI和XbaI之间的272bp条带后的载体用T4DNA连接酶自连后转化大肠杆菌JM109，然后，以质粒pET-28(a)+作模板，分别以p1：5’-GG |
| 摘要 | 结缔组织生长因子抗原的制备方法，对pCOMB3载体双酶切，切除272bp条带后的载体用T4 DNA连接酶自连后转化大肠杆菌，以pET-28(a)+作模板扩增，回收550bp条带，将其与切除后的pCOMB3载体连接，经转化后筛选得阳性质粒；对人内皮细胞原代培养，用牛血清白蛋白对其干预8h，胰蛋白酶消化，用Trizol法提取RNA，合成cDNA，在1.5ml管中加入：ddH2O 31.5μl，10×Taq buffer5μl，10mol/L dNTP 1μl，25pmol/μl的引物，0.65μg/μl的cDNA模板10μl，5U/μl的TaqPlus0.5μl，94℃5min变性，94℃1min，65℃30sec，72℃1min，35个循环，72℃延伸10min，4℃保温下扩增，对PCR产物与阳性质粒双酶切后，用T4DNA连接酶相连两个片段，转化大肠杆菌JM109，得pKMcl；将pKMcl的大肠杆菌单菌落扩增，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷37℃诱导3h，得大肠杆菌，超声破碎，层析得结缔组织生长因子抗原。 |
| 国际公布 |
