| 公开(公告)号 | CN1177051C |
| 公开(公告)日 | 2004.11.24 |
| 申请(专利)号 | CN02136180.0 |
| 申请日期 | 2002.07.25 |
| 专利名称 | 一种重组胸腺素α1的制备方法 |
| 主分类号 | C12N15/16 |
| 分类号 | C12N15/16;C07K14/575 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国人民解放军第二军医大学 |
| 发明(设计)人 | 郭葆玉;苗红;章杰;袁鹏群 |
| 地址 | 200433 上海市杨浦区翔殷路800号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 上海新天专利代理有限公司 |
| 代理人 | 衷诚宣 |
| 国省代码 | 上海;31 |
| 主权项 | 一种重组胸腺素α1的制备方法，包括：(1)融合表达载体的构建；(2)大肠杆菌工程菌的发酵；(3)重组胸腺素α1的制备与纯化；其特征在于所构建的融合表达载体为pGEX-4T-1/Tα1，所用的上游引物为5′-GGGGATCCGACGCAGCCGTAGAC-3′，下游引物为5′GGGAATTCTTATTTTCTGCCTCTTCCAC-3′，模板为人胎盘cDNA，所得的胸腺素α1的氨基酸序列为Gly Ser Asp Ala Ala Val Asp Thr Ser Ser GluIle Thr Thr Lys Asp Leu Lys Glu Lys Lys Glu Val Val GluGlu Ala Glu Asn。 |
| 摘要 | 本发明涉及医药生物工程技术领域，是一种重组胸腺素α1即Gly-Tα1及其制备方法。天然胸腺素α1都采用固相合成法全合成，不仅成本高，而且易污染环境。本发明采用基因工程方法，以5′-GGGGATCCGACGCAGCCGTAGAC-3′为上游引物、5′-GGGAATTCTTATTTTCTGCCTCTTCCAC-3′为下游引物，以人胎盘cDNA为模板进行PCR，扩增出目的基因片段，通过EcoRI/BamHI双酶切将目的基因定向克隆到质粒pGEX-4T-1上构建融合表达载体pGEX-4T-1/Tα1。制备的工程菌可表达出谷胱甘肽硫转移酶-胸腺素α1融合蛋白，亲和层析纯化融合蛋白，凝血酶酶切释放出Gly-Tα1，最后通过亲和层析和离子交换层析纯化出Gly-Tα1。经试验，Gly-Tα1的生物学活性不亚于合成的胸腺素α1。本发明制备方法简单，成本低廉，且不会造成环境污染。 |
| 国际公布 |
