公开(公告)号
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CN1546671A
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公开(公告)日
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2004.11.17
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申请(专利)号
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CN200310115938.X
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申请日期
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2003.12.16
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专利名称
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重组人内皮抑素在大肠杆菌中的高效表达技术
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主分类号
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C12N15/70
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分类号
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C12N15/70;C12N15/12;C12N1/21;C12P21/02;//(C12N15/70,C12R1∶19)
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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中国科学院长春应用化学研究所
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发明(设计)人
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王群
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地址
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130022吉林省长春市人民大街5625号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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代理人
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国省代码
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吉林;22
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主权项
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一种重组人内皮抑素在大肠杆菌中的高效表达技术,将重组质粒pBendo转化表达型宿主菌E.coliBL21(DE3)中,筛选出阳性重组菌E.coliBL21-Endo,接种于2mL、含60~90μg/mL卡那霉素的LB培养液中,在细菌培养箱中,35~38℃,180~220rpm振荡培养12~16h,然后将菌液接种于200mL、含60~90μg/mLKan的LB培养液中,36~38℃,200~250rpm振荡培养2~3h,使菌液OD600nm在0.4~0.6,向菌液中加入终浓度为0.8~1.0mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,在36~37℃下,180~200rpm继续振荡培养3~5h诱导内皮抑素的表达,表达量达到菌体总蛋白的38%。
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摘要
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本发明属于重组人内皮抑素在大肠杆菌中高效表达的技术领域。将人内皮抑素基因其插入原核表达载体pET28b中构建重组表达质粒pBendo,然后转化大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选出阳性重组菌E.coli BL21-Endo,在含卡那霉素的LB培养液中振荡培养,使菌液OD600nm在0.4~0.6,加入终浓度为0.8~1.0m mol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,继续振荡培养诱导内皮抑素的表达。重组内皮抑素蛋白表达量提高到菌体总蛋白的38%。
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国际公布
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