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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:重组人内皮抑素在大肠杆菌中的高效表达技术专利检索:专利号/专利人/发明人
    

重组人内皮抑素在大肠杆菌中的高效表达技术

公开(公告)号 CN1546671A  
公开(公告)日 2004.11.17  
申请(专利)号 CN200310115938.X  
申请日期 2003.12.16  
专利名称 重组人内皮抑素在大肠杆菌中的高效表达技术  
主分类号 C12N15/70  
分类号 C12N15/70;C12N15/12;C12N1/21;C12P21/02;//(C12N15/70,C12R1∶19)  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 中国科学院长春应用化学研究所  
发明(设计)人 王群  
地址 130022吉林省长春市人民大街5625号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构  
代理人  
国省代码 吉林;22  
主权项 一种重组人内皮抑素在大肠杆菌中的高效表达技术,将重组质粒pBendo转化表达型宿主菌E.coliBL21(DE3)中,筛选出阳性重组菌E.coliBL21-Endo,接种于2mL、含60~90μg/mL卡那霉素的LB培养液中,在细菌培养箱中,35~38℃,180~220rpm振荡培养12~16h,然后将菌液接种于200mL、含60~90μg/mLKan的LB培养液中,36~38℃,200~250rpm振荡培养2~3h,使菌液OD600nm在0.4~0.6,向菌液中加入终浓度为0.8~1.0mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,在36~37℃下,180~200rpm继续振荡培养3~5h诱导内皮抑素的表达,表达量达到菌体总蛋白的38%。  
摘要 本发明属于重组人内皮抑素在大肠杆菌中高效表达的技术领域。将人内皮抑素基因其插入原核表达载体pET28b中构建重组表达质粒pBendo,然后转化大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选出阳性重组菌E.coli BL21-Endo,在含卡那霉素的LB培养液中振荡培养,使菌液OD600nm在0.4~0.6,加入终浓度为0.8~1.0m mol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,继续振荡培养诱导内皮抑素的表达。重组内皮抑素蛋白表达量提高到菌体总蛋白的38%。  
国际公布  
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