| 公开(公告)号 | CN1175111C |
| 公开(公告)日 | 2004.11.10 |
| 申请(专利)号 | CN98804988.0 |
| 申请日期 | 1998.03.09 |
| 专利名称 | 将基因整合至哺乳动物细胞特定位点的方法及所用载体 |
| 主分类号 | C12N15/90 |
| 分类号 | C12N15/90;C12N15/85;C12Q1/68;C12N5/10;C12N9/12;C12N15/13;C07K16/28;C12N15/12;C07K14/705;G01N33/53;C12N15/62;C07K19/00 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | 1997.3.14 US 08/819,866; 1998.2.13 US 09/023,715 |
| 申请(专利权)人 | 艾德药品公司 |
| 发明(设计)人 | M·E·雷夫;R·S·巴内特 |
| 地址 | 美国加利福尼亚州 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | PCT/US1998/003935 1998.3.9 |
| 进入国家日期 | 1999.11.11 |
| 专利代理机构 | 中国专利代理(香港)有限公司 |
| 代理人 | 卢新华;谭明胜 |
| 国省代码 | 美国;US |
| 主权项 | 在分离的哺乳动物细胞基因组的靶位点插入所需DNA的方法，所述方法包括下列步骤：(i)用标记质粒转染或转化分离的哺乳动物细胞，所述质粒含有下列序列：(a)对哺乳动物细胞基因组而言为异源的DNA区域，当该区域整合至哺乳动物细胞基因组时，可为同源重组提供独一无二的位点；(b)编码第一个选择标记蛋白部分的第一部分的DNA片段；和(c)至少一种其它选择标记DNA，该DNA有助于选择被标记质粒成功整合的哺乳动物细胞；(ii)通过筛选至少一种其它选择标记而选择含有标记质粒的细胞，所述质粒已整合至该细胞的基因组中；(iii)用靶向质粒转染或转化所述选定细胞，所述质粒含有下列序列：(a)DNA区域，该区域与标记质粒中独一无二的区域相同或与其具有足够的同源性以使所述DNA区域能经由同源重组与所述独一无二的区域重组；(b)编码标记质粒中所含同一第一选择标记的第二部分的DNA片段，其中仅当所述第二部分与第一选择标记蛋白的第一部分联合表达时，才会产生第一选择标记蛋白；和(iv)通过筛选第一个选择标记蛋白的表达选择出含有靶向质粒的细胞，所述质粒整合至靶位点。 |
| 摘要 | 本发明涉及经由同源重组将所需DNA位点特异性地整合至哺乳动物细胞靶位点的方法，此方法能可再现地选择细胞系，在所述细胞系中，所需DNA被整合至已用标记质粒标记的预定的转录活性位点。此方法特别适用于产生哺乳动物细胞系，所述细胞系可高水平分泌哺乳动物蛋白质，尤其是免疫球蛋白。本发明也提供了此克隆方法中所用的载体和载体组合。 |
| 国际公布 | WO1998/041645 英 1998.9.24 |
