| 公开(公告)号 | CN1544629A |
| 公开(公告)日 | 2004.11.10 |
| 申请(专利)号 | CN200310108622.8 |
| 申请日期 | 2003.11.11 |
| 专利名称 | 重组鹅白细胞介素-2蛋白的制备方法及其用途 |
| 主分类号 | C12N15/26 |
| 分类号 | C12N15/26;C12P21/00;C07K14/55;A61K39/39;A61P31/00;A61P31/12;A61P33/00 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 浙江大学 |
| 发明(设计)人 | 周继勇;陈吉刚;王金勇;腾巧泱;吴建祥 |
| 地址 | 310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 杭州求是专利事务所有限公司 |
| 代理人 | 张法高 |
| 国省代码 | 浙江;33 |
| 主权项 | 一种重组鹅白细胞介素-2蛋白的制备方法，其特征在于它的步骤如下：1)自浙东白鹅单核淋巴细胞中克隆出鹅白细胞介素-2(gsIL-2)的DNA片段与含有PBAD启动子的原核表达载体pBAD/HisB组建成表达载体pBAD/HisB/gsIL-2；或者上述gsIL-2DNA片段与含有PAUG1启动子的真核表达载体pMETαB组建成分泌型表达载体pMETαB/gsIL-2；或者上述gsIL-2DNA片段与含有PAUG1启动子的真核表达载体pMETB组建成胞内型表达载体pMETB/gsIL-2；2)用RM作为基础培养基，通过发酵扩增大肠杆菌工程菌LMG194；3)用BMDY作为基础培养基，通过发酵扩增酵母工程菌PMAD11和PMAD16，在表达不同时间加氮源、碳源等营养素；4)大肠杆菌LMG194和酵母菌PMAD16诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即为gsIL-2粗制品，PMAD11表达的gsIL-2主要分泌于培养基中，经过离心取上清即为gsIL-2粗制品。用Ni-NTAArgarose蛋白纯化系统可得到gsIL-2纯品；5)粗制品或纯品加入甘氨酸等稳定剂和助溶剂后，无菌过滤、分装和冻干后制成成品，保存于-20℃的冷藏环境中。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种重组鹅白细胞介素-2(gsIL-2)蛋白的制备方法及其用途。RT-PCR扩增的浙东白鹅白细胞介素-2的DNA片段与原核表达载体pBAD/HisB、真核表达载体pMETαB和pMETB构建表达质粒pBAD/HisB/gsIL-2、pMETαB/gsIL-2和pMETA/gsIL-2，分别转化大肠杆菌LMG194、酵母菌PMAD11和PMAD16后诱导表达。表达量分别占菌体总蛋白的9～10％、20～25％和10～12％。大肠杆菌和酵母菌PMAD16诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即为gsIL-2蛋白粗制品，PMAD11表达的gsIL-2主要分泌于培养基中，离心取上清即为gsIL-2蛋白粗制品。用Ni-NTAArgarose蛋白纯化系统可以较快的得到gsIL-2纯品，粗制品或纯品可以作为免疫佐剂和疾病治疗药物。本发明应用基因工程技术制备的重组gsIL-2蛋白，具有工艺流程简单，生产成本低，稳定性好，生物学活性高等特点。 |
| 国际公布 |
