| 公开(公告)号 | CN1544630A |
| 公开(公告)日 | 2004.11.10 |
| 申请(专利)号 | CN200310108658.6 |
| 申请日期 | 2003.11.12 |
| 专利名称 | 重组鸭白介素2蛋白的制备方法及其用途 |
| 主分类号 | C12N15/26 |
| 分类号 | C12N15/26;A61K39/39;A61K39/395;A61P37/06;C07K14/55 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 浙江大学 |
| 发明(设计)人 | 周继勇;王金勇;吴建祥;陈吉刚 |
| 地址 | 310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 杭州求是专利事务所有限公司 |
| 代理人 | 张法高 |
| 国省代码 | 浙江;33 |
| 主权项 | 一种重组鸭白介素2制备方法，其特征在于它的步骤如下：1)自中国的绍兴麻鸭和外来品种美洲鸭的脾淋巴细胞中克隆出鸭白介素-2的cDNA与含有PBAD启动子的原核表达载体pBAD/hisB组建成高效表达载体pBAD/HisB/dkIL-2；或者与含有PAUG1启动子的真核表达载体pMETαA组建成高效表达载体pMETαA/dkIL-2；2)用RM作为基础培养基，通过发酵扩增大肠杆菌工程菌LMG194；3)用BMDY作为基础培养基，通过发酵扩增酵母工程菌PMAD11和PMAD16，在表达不同时间加氮源、碳源营养素；4)大肠杆菌LMG194诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即可得到鸭白介素2粗制品，PMAD11和PMAD16表达的鸭白介素2主要以分泌形式存在于培养基中，经过离心取上清即可得到鸭白介素2粗制品；用Ni-NTAArgarose蛋白纯化系统可得到鸭白介素2纯品；5)制备的重组鸭白介素2纯品或非纯品加入甘氨酸等稳定剂和助溶剂后，无菌过滤、分装和冻干后制成的成品，保存于-20℃的冷藏环境中；6)鸭白介素2单克隆抗体的制备：用重组鸭白介素2纯品抗原免疫小鼠，经细胞融合，杂交瘤细胞及阳性孔的筛选，阳性孔的特异性检测及特异性阳性孔的克隆，液氮保存。获得的单克隆抗体腹水纯化后，液氮保存；7)鸭白介素2多克隆抗体的制备：用鸭白介素2纯品抗原0.3-0.5mg，加等体积弗氏完全佐剂初次背部皮下注射免疫健康兔子，3周后加等体积弗氏不完全佐剂以同样抗原剂量二次免疫，3周后不加佐剂其它同与前面操作进行三次免疫；7-10天后采血清，试血测其效价再次加强免疫，7天以后采血清测效价，琼扩效价达1∶32-64，离心取上清低温保存。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种重组鸭白介素2蛋白制备方法及其用途。RT-PCR扩增的不同品种鸭的鸭白介素-2cDNA片段与原核表达载体pBAD/his B载体和真核表达载体pMETαA构建高效表达质粒，重组表达载体分别转化大肠杆菌LMG194和酵母菌株PMAD11和PMAD16后诱导表达。大肠杆菌诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即可得到鸭白介素-2粗制品，用蛋白纯化系统得到鸭白介素2纯品。鸭白介素-2粗制品或纯品加保护剂后可以作为免疫佐剂、抗病添加剂和疾病治疗药物。鸭白介素-2单克隆抗体和多克隆抗体的制备过程简单经济，可以作为良好的免疫抑制剂。本发明应用基因工程技术制备的重组鸭白介素-2蛋白，具有工艺流程简单，生产成本低，稳定性好，生物学活性高等特点。 |
| 国际公布 |
