公开(公告)号
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CN1174097C
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公开(公告)日
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2004.11.03
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申请(专利)号
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CN96195808.1
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申请日期
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1996.06.05
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专利名称
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由克隆的维生素D结合蛋白衍生的巨噬细胞激活因子
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主分类号
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C12N15/10
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分类号
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C12N15/10;C07K14/435
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分案原申请号
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优先权
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1995.6.7 US 08/478,121; 1996.3.19 US 08/618,485
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申请(专利权)人
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山本信人
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发明(设计)人
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山本信人
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地址
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美国宾夕法尼亚州
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颁证日
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国际申请
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PCT/US1996/008867 1996.6.5
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进入国家日期
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1998.01.24
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专利代理机构
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永新专利商标代理有限公司
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代理人
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林晓红
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国省代码
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美国;US
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主权项
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用于将维生素D3结合蛋白即Gc蛋白质或维生素D3结合蛋白区域III即Gc区域III克隆到杆状病毒的方法,包括选择和利用杆状病毒载体克隆Gc蛋白质或Gc区域III的步骤:(a)利用免疫筛选方法从人肝λgt11分离全长Gc蛋白质DNA文库并且插入到非融合的杆状病毒载体中;或通过用EcoRI和HaeIII酶消化Gc蛋白质DNA而分离Gc蛋白质的起始前导序列加5’末端4个氨基酸的DNA和Gc蛋白质区域IIIDNA,并利用连接酶将其插入到非融合杆状病毒载体pVL1393的EcoRI位点;或利用HaeIII和BamHI酶分离Gc蛋白质区域IIIcDNA并且利用连接酶将其插入到融合的杆状病毒载体pPbac中以取代信号序列下游的SmaI-BamHI填充片段;(b)通过将昆虫细胞用载体DNA和野生型杆状病毒DNA共转染以分离携带全长Gc蛋白质cDNA或Gc蛋白质区域IIIcDNA的重组杆状病毒;和(c)在昆虫细胞中繁殖重组杆状病毒并且纯化克隆的Gc蛋白质或克隆的区域蛋白质Cd。
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摘要
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借助于杆状病毒载体克隆了维生素D结合蛋白(Gc蛋白质)和其小区域(约为Gc肽的1/5,已知称作为区域III)。用固定化的β-半乳糖苷酶和唾液酸酶处理克隆的Gc蛋白质和克隆的区域(Cd)肽分别产生巨噬细胞激活因子GcMAFc和CdMAF。这些克隆的巨噬细胞激活因子和GcMAF可用于治疗癌症,HIV感染和骨质疏松症,也用作为免疫和接种的佐剂。研制了在癌症和HIV感染的患者中检测血清或血浆α-N-乙酰氨基半乳糖苷酶的方法和抗体-夹心ELISA试剂盒。
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国际公布
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WO1996/040903 英 1996.12.19
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