利用膨胀床色素亲和色谱纯化重组人干扰素α-2b的方法
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公开(公告)号
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CN1539848A
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公开(公告)日
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2004.10.27
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申请(专利)号
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CN200310106725.0
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申请日期
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2003.10.29
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专利名称
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利用膨胀床色素亲和色谱纯化重组人干扰素α-2b的方法
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主分类号
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C07K14/56
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分类号
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C07K14/56;C07K1/16
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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天津大学
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发明(设计)人
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孙彦;赵雪雁;张磊;史清洪;董晓燕;白姝
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地址
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300072天津市卫津路92号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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天津市学苑有限责任专利代理事务所
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代理人
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解松凡
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国省代码
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天津;12
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主权项
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一种利用膨胀床色素亲和色谱纯化重组人干扰素α-2b的方法，该方法是采用柱内装填辛巴蓝修饰的石英核琼脂糖介质的膨胀床色素亲和色谱，其过程包括介质的修饰、吸附和脱附，其特征在于：介质的修饰是以1-3mol/L的氯化钠溶液配制成含辛巴蓝浓度0.35-9g/L和含氢氧化钠的浓度为3.5-36g/L的溶液，在该溶液中加入等体积的粒径为80-500μm密度为15-3g/mL的石英核琼脂糖介质，并在40-70℃水浴摇床中反应10h以上，得到辛巴蓝修饰的石英核琼脂糖介质；吸附工艺是：采用pH为6.0-8.0的0.002mol/L的磷酸钠盐缓冲液稀释细胞破碎液，配制成活性值为2.5×105-2.5×107IU/mL的原料液；将辛巴蓝修饰石英核琼脂糖介质装柱后用pH为6.0-8.0的0.001-0.02mol/L的磷酸钠盐缓冲液平衡，于20-30℃，以流速为80-260cm/h从膨胀床底部通入原料液，上样量为每升柱体积1-5L原料液，并控制床层膨胀比为5-3.0进行吸附操作；以pH为6.0-8.0的0.001-0.02mol/L的磷酸钠盐缓冲液，以80-260cm/h的流速在膨胀床状态下清洗1-4个柱体积，包括去除杂蛋白和细胞碎片固形物；在固定床操作状态用pH为9-13的0.002-0.03mol/L甘氨酸-氢氧化钠缓冲液洗脱目标蛋白，在洗脱过程中，观察色谱峰值，当色谱峰响应值达到基线位置时洗脱完毕。
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摘要
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本发明公开了一种利用膨胀床色素亲和色谱纯化重组人干扰素α-2b的方法。该方法包括介质的制备、吸附和脱附，其特征在于，以粒径为80-500μm密度为1.15-1.3g/mL的石英核琼脂糖介质，在碱性条件下修饰辛巴蓝配基，合成介质；采用磷酸钠盐缓冲液稀释细胞破碎液，配制成活性值为2.5×105-2.5×107IU/mL的原料液；并以流速为80-260cm/h从膨胀床底部通入原料液，控制床层膨胀比为1.5-3.0进行吸附操作；用磷酸钠盐缓冲液在膨胀床状态下清洗杂蛋白；之后在固定床操作状态用甘氨酸-氢氧化钠缓冲液洗脱目标蛋白。该纯化方法大大缩短了分离过程的时间，提高产品活性收率，降低能耗。本发明在重组人干扰素α-2b的纯化过程中具有广阔的应用前景。
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国际公布
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