| 公开(公告)号 | CN1171640C |
| 公开(公告)日 | 2004.10.20 |
| 申请(专利)号 | CN02114462.1 |
| 申请日期 | 2002.03.08 |
| 专利名称 | 肝癌超抗原免疫基因治疗剂的制备方法 |
| 主分类号 | A61K48/00 |
| 分类号 | A61K48/00 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 发明(设计)人 | 隋延仿 |
| 地址 | 710032 陕西省西安市长乐西路17号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 西安通大专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 陈翠兰 |
| 国省代码 | 陕西;61 |
| 主权项 | 肝癌超抗原免疫基因治疗剂的制备方法，其特征在于：从甲胎蛋白AFP高分泌的肝癌细胞中分离细胞基因组总DNA，设计特异性引物，通过PCR方法扩增AFP启动子和顺式增强子序列；分别从肠葡萄球菌场毒素A标准菌株FRI100基因组中通过PCR扩增SEA基因全序列和蛋白编码序列，定点突变SEA基因位点，同时从人B细胞通过反转录PCR分别扩增共刺激分子B7.1基因编码胞外区序列B7.1exc和跨膜区序列B7.1tm；将上述片段克隆至Clontech公司生产的逆转录病毒真核表达载体pLXSN中，分别构建以AFP启动子和增强子为调控元件的B7.1exc-SEA-B7.1tm和SEA-B7.1tm目的基因逆转录真核表达载体；将目的基因逆转录病毒载体在病毒包装细胞系PA317、φ2中进行包装；以包装好的缺陷病毒颗粒感染人肝癌细胞，表达出SEA-B7.1融合蛋白；以视黄素、地塞米松、雌激素等药物对SEA-B7.1的表达进行调控，同时通过检测AFP水平来判断治疗效果；利用AFP特异性调控序列调控目的基因B7.1exc-SEA-B7.1tm和SEA-B7.1tm的表达，通过设计特异性引物：5’CGCAACTTAGGGACAAGT 3’TGTTATTGGCAGTGG和5’GCTGGCTTCACAGACTTATG 3’GGAGACCAGTTAGG AAGT，通过PCR方法扩增AFP启动子和顺式增强子序列，其序列如下：AFP启动子序列GCAACTTAGGGACAAGTCATCTCTTTGAATATTCTGTAGTTTGAGGAGAATATTTGTTATATTTGCAAAATAAAATAAGTTTGCAAGTTTTTTTTTTCTGCCCCAAAGAGCTCTGTGTCCTTGAACATAAAATACAAATAACCGCTATGCTGTTAATTATTGGCAAATGTCCCATTTTCAACCTAAGGAAATACCATAAAGTAACAGATATACCAACAAAAGGTTACTAGTTAACAGGCATTGCCTGAAAAGAGTATAAAAGAATTTCAGCATGATTTTCCATATTGTGCTTCCACCACTGCCAATAACAAFP增强子序列GCTGGCTTCACAGACTTATGAAAAAGTAAACGGAATCAGAATTACATCAATGCAAAAGCATTGCTGTGAACTCTGTACTTAGGACTAAACTTTGAGCAATAACACATATAGATTGAGGATTGTTTGCTGTTAGTATACAAACTCTGGTTCAAAGCTCCTCTTTATTGCTTGTCTTGGAAAATTTGCTGTTCTTCATGGTTTCTCTTTTCACTGCTATCTATTTTTCTCAACCACTCACATGGCTACAATAACTGTCTGCAAGCTTATGATTCCCAAATATCTATCTCTAGCCTCAATCTTGTTCCAGAAGATAAAAAGTAGTATTCAAATGCACATCAACGTCTCCACTTGGAGGGCTTAAAGACGTTTCAACATACAAACCGGGGAGTTTTGCCTGGAATGTTTCCTAAAATGTGTCCTGTAGCACATAGGGTCCTCTTGTTCCTTAAAATCTAATTACTTTTAGCCCAGTGCTCATCCCACCTATGGGGAGATGAGAGTGAAAAGGGAGCCTGATTAATAATTACACTAAGTCAATAGGCATAGAGCCAGGACTGTTTGGGTAAACTGGTCACTTTATCTTAAACTAAATATATCCAAAACTGAACATGTACTTAGTTACTAAGTCTTTGACTTTATCTCATTCATACCACTCAGCTTTATCCAGGCCACTTATTTGACAGTATTATTGCGAAAACTTCCTAACTGGTCTCC，其特点是将所获得的调控序列置于目的基因上游，特异性调控目的基因的表达。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种涉及基因工程技术的肝细胞癌(肝癌)超抗原免疫基因治疗剂的制备方法，制备肝癌特异性启动子和增强子调控序列介导的超抗原分子和共刺激分子在肝癌细胞进行靶向表达的治疗剂，特异性增强肝癌细胞的免疫原性和与免疫效应细胞的识别作用。将此治疗剂通过介入方式送到癌区，可有效杀伤肝癌细胞，治疗时可利用相关药物调控肝癌特异性启动子和增强子的活性来调节超抗原分子和共刺激分子的表达，并通过肝癌特异性启动子和增强子调控的自身产物水平判断治疗效果。同时利用肝癌特异性抗原、超抗原分子和共刺激分子在体外诱导自身T淋巴细胞进行过继免疫治疗，辅助癌区免疫治疗，以增强疗效、治疗转移病灶和预防复发。本发明的肝癌细胞超抗原免疫基因治疗剂具有以下特点：(1)安全性；(2)靶向性；(3)可控性；(4)灭癌高效性，是一种很有前景的肝癌免疫基因治疗剂。 |
| 国际公布 |
