公开(公告)号
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CN1171899C
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公开(公告)日
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2004.10.20
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申请(专利)号
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CN02100558.3
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申请日期
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2002.02.05
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专利名称
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一种新型纤溶酶原激活剂(TPA)突变体的结构与用途
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主分类号
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C07H21/00
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分类号
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C07H21/00;C07K14/00;C12N15/64;A61K38/16;A61P9/10
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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中国人民解放军空军总医院
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发明(设计)人
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朱美财;李文;占志;王荫静
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地址
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100036 北京市阜成路30号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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代理人
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国省代码
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北京;11
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主权项
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TPA突变体的核苷酸序列(5’-3’):1 atgtcttaccaaggaaacagtgactgctactttgggaatgggtcagcctaccgtggcacg 6061 cacagcctcaccgagtcgggtgcctcctgcctcccgtggaattccatgatcctgataggc 120121 aaggtttacacagcacagaaccccagtgcccaggcactgggcctgggcaaacataattac 180181 tgccggaatcctgatggggatgccaagccctggtgccacgtgctgaagaaccgcaggctg 240
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摘要
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本发明是根据TPA的结构特点,在将TPA分子中指状区和Kringlel区去掉的基础上,将TPA分子中PAI-1结合位点氨基酸进行突变,构建具有TPA活性且其活性不被PAI-1抑制的新一代TPA突变体。主要内容是扩增出天然TPA氨基酸1-3和176-527的DNA序列。将TPA DNA中PAI-1结合位点,核苷酸序列373-384的AAG CAC AGG AGG改变为GCG GCC GCG GCG,使相应的氨基酸KHRR突变为AAAA,构建了新的TPA突变体,并克隆于大肠杆菌表达载体。在大肠杆菌中得到高效表达。表达蛋白占总菌体蛋白的30%,以包涵体形式存在。经蛋白质复性,得到了有活性的TPA突变体。将新的TPA突变体,克隆于比赤酵母分泌型表达载体,在培养上清中得到高活性的TPA突变体。在大肠杆菌和比赤酵母表达的新的TPA突变体与PAI-1反应后TPA活性无抑制。说明核苷酸序列373-384和其相对应的氨基酸序列影响PAI-1结合活性,而不影响其纤溶酶原水解活性。故本发明涉及针对一种新型TPA突变体的核苷酸序列和结构及其成为治疗活性好、用量少的治疗心肌梗塞和脑血栓等血栓性疾病的新型生物工程药物。
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国际公布
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