公开(公告)号
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CN1166687C
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公开(公告)日
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2004.09.15
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申请(专利)号
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CN98102581.1
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申请日期
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1998.07.03
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专利名称
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胆汁中的生长因子和愈伤因子的分子组合药物
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主分类号
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C07K14/475
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分类号
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C07K14/475;A61K35/413;A61K38/18
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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徐建兴
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发明(设计)人
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徐建兴;康健
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地址
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100101 北京市朝阳区大屯路15号中科院生物物理所
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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北京万科园知识产权代理有限责任公司
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代理人
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张亚军;曹诗健
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国省代码
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北京;11
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主权项
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一种用生化方法从胆汁中制备的生长因子,它是糖蛋白,其特征在于:所分离的糖蛋白表观分子量40-50KD,测得各项分析指标如下:比旋光度:[α]20D=-11.7°(c0.35,H2O)糖含量(硫酸-苯酚法):4.7%蛋白含量(Folin-Lowry法):30.3%糖的组成和比例:L-鼠李糖∶L-阿拉伯糖∶D-木糖∶D-甘露糖∶D-半乳糖为1.8∶14.0∶17.5∶4.0∶2.7;蛋白的氨基酸组成 氨基酸 含量 氨基酸 含量 牛黄酸 0.7天冬氨酸 7.7苏氨酸 6.3丝氨酸 12.7谷氨酸 6.8甘氨酸 21.6丙氨酸 8.5缬氨酸 5.7异亮氨酸 5.9 亮氨酸 6.3酪氨酸 1.6苯丙氨酸 3.0鸟氨酸 4.0赖氨酸 1.7组氨酸 1.5精氨酸 3.5脯氨酸 2.5糖蛋白红外IR特征峰:3400cm-1(OH或NH),2920cm-1(甲氧基),2850cm-1(甲氧基),1739.5cm-1(羰基),1469.6cm-1,1242.0cm-1,1105.0cm-1,964.2cm-1,842.8cm-1;核磁共振氢谱(1H-NMR): Chemical shiftsAssigrments(ppm) Chemical shiftsAssigments(ppm) 4.95(m) -O-CH-O4.82(m) -O-CH-O4.29(w)4.00(m) -CH2-O3.64(m) -CH2-O3.45(m) -CH2-O3.19(s) CH3-O-R 3.16(s) CH3-O-R2.12(m) CH3-CO-R2.00(m) C-CH2-C-O-1.50(s) C-CH2-C1.29(s) C-CH2-C0.94(s) CH3-C注:s强,m中,w弱,所述糖蛋白的分离制备方法如下:无菌条件下取出胆汁后于3000-5000转离心20-30分钟,所得上清液进行Sephadex柱层析分离可得一含糖和蛋白的混合峰,收集混合峰ERF再按下述方法进一步分离纯化;方法1:待分离样液先用乙酸分成沉淀和上清液两部分,沉淀ERF-A难溶于水,易溶于乙醇,含糖量低于上清液部分;上清液ERF-B能溶于水,不溶于乙醇;ERF-B用DEAE-Sephadex A-25层析分离,结果分成四个组分:B1:定性检测表明不是糖类;B2:保留时间21.4min;B3:主要含糖组分,有杂质,主要峰保留时间16.33min;B4:组成类似于B3;B3用Sephacryl S-300凝胶过滤法纯化,主要组分用HPLC分析纯度,结果表明在分离过程中发生了降解,可能是由于加入了乙醇引起的;B3为分离、纯化的目的产物;方法2:ERF加热溶于水后直接用DEAE-Sephadex A-25分离,所得到的ERF-3相应于方法1中的B3;HPLC检测纯度为85%;收集方法1和2的含糖产物峰B3和ERF-3,再经Sephacryl S-300柱层析可得到胆汁糖蛋白。
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摘要
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本发明公开胆汁来源的生长因子:胆汁多糖、胆汁糖蛋白和胆汁多肽,它们具有刺激巨噬细胞和上皮细胞等多种细胞生长和增殖的能力。利用胆汁糖蛋白、胆汁多肽和胆汁多糖或它们与胆汁酸胆色素的分子组合制成愈伤因子可用医疗为目的,治疗各种溃疡、创伤、各种皮疹、炎症和用于化妆品添加剂。
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国际公布
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