公开(公告)号
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CN1161376C
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公开(公告)日
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2004.08.11
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申请(专利)号
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CN95196963.3
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申请日期
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1995.10.23
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专利名称
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生产分离及纯化的摩拉克氏菌的主要外膜蛋白CD的方法
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主分类号
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C07K14/22
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分类号
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C07K14/22;A61K39/02;G01N33/569;C07K16/12
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分案原申请号
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优先权
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1994.10.24 US 08/328,589
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申请(专利权)人
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康诺特实验室有限公司
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发明(设计)人
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Y·P·杨;R·E·哈克尼斯
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地址
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加拿大安大略省
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颁证日
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2004.08.11
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国际申请
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PCT/CA1995/000604 1995.10.23
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进入国家日期
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1997.06.20
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专利代理机构
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中国专利代理(香港)有限公司
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代理人
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卢新华;温宏艳
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国省代码
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加拿大;CA
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主权项
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一种从产CD蛋白的细菌菌株生产分离及纯化的外膜蛋白CD的方法,包括如下步骤:(a)提供此细菌菌株的细胞团;(b)将此细胞团裂解产生细胞裂解液;(c)将此细胞裂解液分级分离,得到初级上清和初级沉淀,上清里含有基本上大部分可溶性细菌蛋白;(d)将所述初级上清与初级沉淀分开;(e)选择性抽提初级沉淀,基本上去掉所有可溶蛋白和除CD蛋白以外的膜蛋白,并产生次级上清和包含CD蛋白的经抽提的沉淀;(f)将此次级上清与经抽提的沉淀分开;(g)溶解此经抽提的沉淀得到溶解的抽提物;(h)把此溶解的抽提物分级分离,产生含CD蛋白的上清和应弃掉的沉淀;然后(i)将此含CD的上清与欲弃掉的沉淀分开。
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摘要
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一种分离并纯化的非变性外膜蛋白CD通过一种分离方法得到,此蛋白本身是或相当于一种摩拉克氏菌株,特别是粘膜炎摩拉克氏菌的可分离部分。分离时把大批细菌裂解然后离心形成沉淀,并弃去包含在部分可溶蛋白的上清。此沉淀再选择性地抽提以去掉剩下的可溶性蛋白。除CD外的其它膜蛋白和其他杂质例如脂多糖和磷脂。剩下的包含CD的沉淀被分散和溶解,然后离心分级分离去掉余下的细胞残渣。该CD蛋白可用于诊断和免疫原性组合物,特别是在宿主体内施用提供抗疾病保护,该疾病是由于产生CD蛋白或另一种蛋白的细菌病原体引起的,其中该另一种蛋白可在宿主内诱导特异性与CD蛋白反应的抗体。
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国际公布
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WO1996/012733 英 1996.5.2
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