| 公开(公告)号 | CN1513985A |
| 公开(公告)日 | 2004.07.21 |
| 申请(专利)号 | CN03126889.7 |
| 申请日期 | 2003.06.13 |
| 专利名称 | 人胚肾293细胞亚克隆细胞株 |
| 主分类号 | C12N5/10 |
| 分类号 | C12N5/10;C12N15/11;C12N15/53;C12N9/02 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 张晓志;彭朝晖 |
| 发明(设计)人 | 张晓志;彭朝晖 |
| 地址 | 518057广东省深圳市高新技术产业园（北区)郎山路赛百诺公司 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 深圳市中知专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 成义生 |
| 国省代码 | 广东;44 |
| 主权项 | 一种用于生产重组腺病毒制品的人胚肾293细胞亚克隆细胞株，其特征在于，该细胞株是由ATCC 293细胞经亚克隆方法制得，它含有下列序列的人三磷酸甘油醛脱氢酶(human g1yceraldehydes-3-phosphatedehydrogenase，GAPD)：1 ctctctgctc ctcctgttcg acagtcagcc gcatcttctt ttgcgtcgcc agccgagcca61 catcgctcag acaccatggg gaaggtgaag gtcggagtca acggatttgg tcgtattggg121 cgcctggtca ccagggctgc ttttaactct ggtaaagtgg atattgttgc catcaatgac181 cccttcattg acctcaacta catggtttac atgttccaat atgattccac ccatggcaaa241 ttccatggca ccgtcaaggc tgagaacggg aagcttgtca tcaatggaaa tcccatcacc301 atcttccagg agcgagatcc ctccaaaatc aagtggggcg atgctggcgc tgagtacgtc361 gtggagtcca ctggcgtctt caccaccatg gagaaggctg gggctcattt gcagggggga421 gccaaaaggg tcatcatctc tgccccctct gctgatgccc ccatgttcgt catgggtgtg481 aaccatgaga agtatgacaa cagcctcaag atcatcagca atgcctcctg caccaccaac541 tgcttagcac ccctggccaa ggtcatccat gacaactttg gtatcgtgga aggactcatg601 accacagtcc atgccatcac tgccacccag aagactgtgg atggcccctc cgggaaactg661 tggcgtgatg gccgcggggc tctccagaac atcatccctg cctctactgg cgctgccaag721 gctgtgggca aggtcatccc tgagctgaac gggaagctca ctggcatggc cttccgtgtc781 cccactgcca acgtgtcagt ggtggacctg acctgccgtc tagaaaaacc tgccaaatat841 gatgacatca agaaggtggt gaagcaggcg tcggagggcc ccctcaaggg catcctgggc901 tacactgagc accaggtggt ctcctctgac ttcaacagcg acacccactc ctccaccttt961 gacgctgggg ctggcattgc cctcaacgac cactttgtca agctcatttc ctggtatgac1021 aacgaatttg gctacagcaa cagggtggtg gacctcatgg cccacatggc ctccaaggag1081 taagacccct ggaccaccag ccccagcaag agcacaagag gaagagagag accctcactg1141 ctggggagtc cctgccacac tcagtccccc accacactga atctcccctc ctcacagttg1201 ccatgtagac cccttgaaga ggggaggggc ctagggagcc gcaccttgtc atgtaccatc1261 aataaagtac cctgtgctca acc其中，(1)自76-1083是编码GAPD 1-335氨基酸序列(如下所示)的基因组序列：MGKVKVGVNGFGRIGRLVTRAAFNSGKVDIVAINDPFIDLNYMVYMFQYDSTHGKFHGTVKAENGKLVINGNPITIFQERDPSKIKWGDAGAEYVVESTGVFTTMEKAGAHLQGGAKRVIISAPSADAPMFVMGVNHEKYDNSLKIISNASCTTNCLAPLAKVIHDNFGIVEGLMTTVHAITATQKTVDGPSGKLWRDGRGALQNIIPASTGAAKAVGKVIPELNGKLTGMAFRVPTANVSVVDLTCRLEKPAKYDDIKKVVKQASEGPLKGILGYTEHQVVSSDFNSDTHSSTFDAGAGIALNDHFVKLISWYDNEFGYSNRVVDLMAHMASKE(2)自1261-1266为多聚腺苷腺尾polyA。 |
| 摘要 | 一种用于生产重组腺病毒制品的人胚肾293细胞亚克隆细胞株，该细胞株是由ATCC 293细胞经亚克隆方法制得，它含有人三磷酸甘油醛脱氢(human glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase，GAPD)，该细胞株由下列方法培养制得：a、将ATCC 293细胞(P32)复苏后进行细胞扩增传代至第33代次(P33)，然后将P33细胞悬液用FACS流式细胞仪进行亚克隆；b、用2个96孔板，每孔中0.2ml培养基中放置一个细胞，在36～38℃、3～6％CO2条件下培养6～10天；c、挑选出细胞形态均一、生长良好的、已达到不低于60％铺满生长的克隆；d、重复上述步骤四次，最后挑选出1个亚克隆的细胞柱(P37)，继续培养扩增并制成原代细胞库(P38)，置于-80℃冻存；e、以原代细胞库(P38)为基础制备主代细胞库及工作细胞库。本发明应用基因工程技术和分子克隆技术，使其具有明显增强细胞的贴壁生长的功能和细胞生长倍增时间短的优点。 |
| 国际公布 |
