| 公开(公告)号 | CN1511953A |
| 公开(公告)日 | 2004.07.14 |
| 申请(专利)号 | CN02159949.1 |
| 申请日期 | 2002.12.30 |
| 专利名称 | 一种重组人淋巴毒素α的构建与生产工艺 |
| 主分类号 | C12N15/70 |
| 分类号 | C12N15/70;C12N15/19;C12N1/21;C12P21/02;C07K1/18;C07K14/52 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 北京三元基因工程有限公司;北京毕艾欧科技发展有限责任公司 |
| 发明(设计)人 | 刘永全;牛晓霞;刘金毅;孙俭波;程永庆 |
| 地址 | 102600北京市大兴工业开发区金苑路1号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | 一种重组人淋巴毒素α(rhLT-α)的构建与生产工艺，主要包括：用RT-PCR的方法获得rhLT-α的cDNA，并将其克隆入原核表达载体，转化大肠杆菌获得工程菌株，工程菌通过一系列的发酵、粗纯和精制过程获得rhLT-α纯品，其特征在于：(1)rhLT-α与天然分子相比，N端缺失了27个氨基酸残基，包括附加上的第一个甲硫氨酸残基，整个分子共有145个氨基酸残基组成；(2)所用的原核表达载体带有T7启动子；(3)发酵培养基使用改良M9培养基或其它适合工程菌生长的培养基；(4)包涵体洗涤后用高浓度的尿素或盐酸胍增溶；(5)复性液使用Tris-HCl缓冲液或硼酸溶液；(6)相继用阴离子交换柱层析、Phenyl-Sepharose FF疏水柱层析和阴离子交换柱层析进行纯化。 |
| 摘要 | 本发明的rhLT-α与天然分子相比，其N端缺失了27个氨基酸残基，本表明利用反转录PCR获得了目的基因序列，然后构建了高效重组表达载体，转化大肠杆菌获得高表达工程菌株，并建立了工程菌发酵、包涵体洗涤和复性、以及利用多种层析介质获得rhLT-α纯品的方法。纯化总收率高于40％，样品纯度高于99％，比活性与国际同类产品相当。因此本发明得到的工程菌和建立的纯化工艺适合于rhLT-α的大规模生产。 |
| 国际公布 |
