| 公开(公告)号 | CN1136317C |
| 公开(公告)日 | 2004.01.28 |
| 申请(专利)号 | CN99115730.3 |
| 申请日期 | 1999.03.12 |
| 专利名称 | 单克隆抗体双段和单段的制备方法 |
| 主分类号 | C12P21/02 |
| 分类号 | C12P21/02 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 发明(设计)人 | 米力;陈志南;冯强;余晓玲 |
| 地址 | 710032 陕西省西安市长乐西路17号 |
| 颁证日 | 2004.01.28 |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 西安通大专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 李郑建 |
| 国省代码 | 陕西;61 |
| 主权项 | 单克隆抗体双段和单段的制备方法，其特征是：单克隆抗体腹水，用50％的饱和硫酸胺粗提二次，抗体蛋白沉淀物用0.1M柠檬酸缓冲液(PH3.5)充分溶解后，调正浓度为10-20mg/ml，再离心去除不溶物；F(ab’)2制备用胃蛋白酶与IgG酶切比例为1∶100，37℃反应2-3h，用3M Tris调正PH7左右，以终止反应；Fab用木瓜蛋白酶，酶与IgG的比例1∶100，37℃反应1-2h，0.25％(W/V)碘乙酰胺终止反应；HPLC疏水液相色谱法纯化F(ab’)2，Fab片段抗体，用Phenyl Sepharose High Performance疏水色谱柱(Pharmacia)分二次纯化：一次纯化A液为1～1.4M硫酸胺0.05M PH5.0醋酸钠缓冲液，B液为0.05M PH5.0醋酸钠缓冲液；二次纯化A液用0.7～1.0M硫酸胺0.05M PH5.0醋酸钠缓冲液，B液为0.05M PH5.0醋酸钠缓冲液，线性梯度洗脱时间30-40分钟；纯化后立即冻干，加10％低分子右旋糖酐做复性剂。 |
| 摘要 | 单克隆抗体双段和单段的制备方法。涉及生物技术工程，其主要技术路线是：粗提抗体→酶切→二次纯化→冻干，制备的F(ab’)2、Fab的纯度可大于98％，回收率大于50％，且可有效去除热原质，核酸、病毒等杂质，在安全、有效、稳定、一致性上，均达到中国药品生物制品鉴定所人用鼠源性单抗质量标准。 |
| 国际公布 |
