获得具有正确键合的胱氨酸键的胰岛素或胰岛素衍生物的方法
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公开(公告)号
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CN1483831A
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公开(公告)日
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2004.03.24
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申请(专利)号
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CN03152330.7
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申请日期
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1998.08.17
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专利名称
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获得具有正确键合的胱氨酸键的胰岛素或胰岛素衍生物的方法
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主分类号
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C12P21/02
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分类号
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C12P21/02
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分案原申请号
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98117909.6
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优先权
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1997.8.18 DE 19735711.3
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申请(专利权)人
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阿文蒂斯药物德国有限公司
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发明(设计)人
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F·J·鲁伯洛德;R·凯勒
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地址
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联邦德国法兰克福
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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中国国际贸易促进委员会专利商标事务所
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代理人
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郭建新
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国省代码
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德国;DE
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主权项
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一种从胰岛素或胰岛素衍生物的前体获得具有正确键合的胱氨酸键的胰岛素或胰岛素衍生物的方法，所述前体在半胱氨酸或盐酸半胱氨酸和离液助剂的存在下经历一个折叠过程，在该折叠过程之后，通过如下方式从所述前体获得胰岛素或胰岛素衍生物：采用胰蛋白酶或类胰蛋白酶并且任选另外采用羧肽酶B进行酶裂解，接着在吸附树脂上进行纯化；该方法包括依次实施以下步骤以完成所述折叠过程：(a)将胰岛素或胰岛素衍生物的前体的水悬浮液与一定量的半胱氨酸或盐酸半胱氨酸混合，该量导致1～15个半胱氨酸或盐酸半胱氨酸的SH残基/前体的半胱氨酸残基；(b)在pH值约8～约15、温度约15～约55℃下，将含半胱氨酸或盐酸半胱氨酸的前体悬浮液加入到浓度为4～9M的离液助剂溶液中，使所得混合物在所述温度下保持约10～60分钟；和(c)在pH值约8～约15、温度约5～约30℃下，将混合物加入到一定量的水中，使得混合物中半胱氨酸或盐酸半胱氨酸的浓度稀释到大约1～5mM，离液助剂的浓度稀释到0.2～0M。
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摘要
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一种从胰岛素或胰岛素衍生物的前体获得具有正确键合的胱氨酸键的胰岛素或胰岛素衍生物的方法，所述前体在半胱氨酸或盐酸半胱氨酸和离液助剂的存在下经历一个折叠过程，在该折叠过程之后，通过如下方式从所述前体获得胰岛素或胰岛素衍生物：采用胰蛋白酶或类胰蛋白酶并且任选另外采用羧肽酶B进行酶裂解，接着在吸附树脂上进行纯化。
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国际公布
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