| 公开(公告)号 | CN1141389C |
| 公开(公告)日 | 2004.03.10 |
| 申请(专利)号 | CN00112673.3 |
| 申请日期 | 2000.02.03 |
| 专利名称 | 一种重组葡激酶的生产方法 |
| 主分类号 | C12N9/70 |
| 分类号 | C12N9/70;C12N1/21;C12N15/58;A61K38/50 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 成都金鹏生物技术有限公司;中国科学院上海植物生理研究所 |
| 发明(设计)人 | 王家驯;王世鹏;佟彬 |
| 地址 | 610041 四川省成都市高新区神仙路西路6号5-1-10 |
| 颁证日 | 2004.03.10 |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 上海新天专利代理有限公司 |
| 代理人 | 吕振萱 |
| 国省代码 | 四川;51 |
| 主权项 | 一种重组葡激酶的生产方法，包括如下步骤：(1)将含有葡激酶基因的工程菌菌体经冰冻，解冻，冰冻反复循环至少两次；(2)在步骤(1)得到的经过循环后的菌体中加入冻融液；(3)将步骤(2)得到的混合液离心，提取上清液；(4)将步骤(3)得到的上清液经两步柱层析纯化，得到葡激酶原液；(5)将步骤(4)得到的葡激酶原液，加入保护剂，冻干后得到重组葡激酶产品；所述的冰冻温度为-70℃；所述的冻融液为磷酸盐缓冲液；所述离心提取上清液时，高速离心机的转速为4000-5000rpm；所述上清液在两步纯化过程中采用SP.sepharose FF和Phenyl Sepharose FF柱层析；所述含有葡激酶基因的工程菌EcoliH15保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC NO.0432。 |
| 摘要 | 一种重组葡激酶的生产方法，属于生物医学基因工程技术领域，其特征是将已构建好的葡激酶基因工程菌菌体经冰冻-解冻-冰冻反复循环数次，加入冻融液，将冻融液离心提取上清液，经两步柱层析纯化，上样经洗脱、收集、超滤脱盐、浓缩，除菌过滤得到葡激酶原液、冻干后得到本发明产品。该方法大大降低生产过程中葡激酶表达量的损失，延长分离介质使用寿命。设备成本低，能保持细胞完整，生产过程简单、方便、稳定。 |
| 国际公布 |
