定量测定方法骨形成蛋白(BMP)活性细胞株的建立方法
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公开(公告)号
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CN1139654C
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公开(公告)日
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2004.02.25
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申请(专利)号
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CN01131813.9
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申请日期
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2001.12.07
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专利名称
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定量测定骨形成蛋白（BMP)活性细胞株的建立方法
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主分类号
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C12N5/10
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分类号
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C12N5/10;C12Q1/25;C12Q1/06
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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中国人民解放军第四军医大学
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发明(设计)人
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朱帮福;陈苏民;陈南春
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地址
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710032 陕西省西安市长乐西路17号
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颁证日
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2004.02.25
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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西安通大专利代理有限责任公司
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代理人
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李郑建
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国省代码
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陕西;61
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主权项
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定量测定骨形成蛋白活性的细胞株的建立方法，包括以下步骤：a.首先将串联6个BMP作用关键元件的骨钙素部分启动子连接上荧光素酶报告基因，克隆、构建其真核表达载体；该启动子序列为：5’-CCAAC CACACCAAC CACA CCAAC CACA CCAAC CACA CCAAC CACA CCAAC CACAGCC GAT ATA AAT GCT ACT GGA TGC TGG AGG GTG CAG AAC AGA CAAGTC-3’；b.然后转入成肌细胞C2C12中，利用载体本身的抗性基因用抗生素进行压力筛选，获得稳定表达荧光素酶报告基因的单克隆细胞株；荧光素酶报告基因的表达产物为荧光素酶，荧光素酶的活性可通过检测其分解底物产生荧光量测得；具体检测方法为：收集BMP刺激、培养2天的单克隆细胞，加入细胞裂解液，待细胞完全裂解后高速离心5分钟，然后取部分离心上清，加入到一定量的荧光素酶作用底物液中，在化学发光检测仪上测定产生荧光量；上述真核表达载体也可转入其它细胞系，如NIH3T3、C3H10T1/2细胞中；c.通过检测各细胞株对BMP作用的反应性，最终挑选到对BMP刺激反应强度高、检测指标—荧光素酶分解产生荧光量灵敏的细胞株；d.经过特异性、稳定性等检验证实，该细胞株稳定可靠，适用于BMP活性的定量测定。
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摘要
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本发明公开了一种定量测定骨形成蛋白(BMP)活性的细胞株的建立方法，利用分子生物学转基因技术将BMP作用靶分子骨钙素的部分启动子(串联6个关键作用元件)连同荧光素酶报告基因，转入成肌细胞C2C12中，经过筛选获得稳定表达荧光素酶报告基因的单克隆细胞株，并检测各细胞株对BMP作用的反应性；最终挑选到对BMP刺激反应强度高、检测指标(荧光素酶)灵敏的细胞株。经过特异性、稳定性等检验，证实该细胞株稳定可靠；通过检测多批BMP样品结果显示，BMP的作用剂量大小与荧光素酶活性高低呈良好的线性正相关。本发明所建立的细胞株适用于BMP活性的定量测定。
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国际公布
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