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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:一种利用大肠杆菌发酵制备小干扰RNA分子的方法专利检索:专利号/专利人/发明人
    

一种利用大肠杆菌发酵制备小干扰RNA分子的方法

公开(公告)号 CN1458279A  
公开(公告)日 2003.11.26  
申请(专利)号 CN03129043.4  
申请日期 2003.06.05  
专利名称 一种利用大肠杆菌发酵制备小干扰RNA分子的方法  
主分类号 C12P19/34  
分类号 C12P19/34;C12N15/70  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 复旦大学;上海复旦新杨生物科技有限责任公司  
发明(设计)人 钱志康;宣宝琴;李琳;徐剑锋  
地址 200433上海市邯郸路220号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 上海正旦专利代理有限公司  
代理人 陆飞  
国省代码 上海;31  
主权项 一种制备RNAi用siRNA分子的方法,其特征在于包括构建长链dsRNA表达载体,并转化大肠杆菌宿主菌,通过工业化规模发酵,用碱-SDS法抽提发酵菌体得到全RNA和质粒DNA的混合物;该混合物用CF-11柱进行纯化得到dsRNA;最后利用大肠杆菌RNase III将长链的dsRNA切成12-30bp的小干扰RNA。  
摘要 本发明涉及一种利用大肠杆菌发酵大规模制备RNA干扰用小干扰RNA分子的新方法。本发明构建了长双链RNA表达载体,并转化大肠杆菌宿主菌,通过大规模发酵,用碱-SDS法抽提发酵菌体得到全RNA和质粒DNA的混合物。该混合物用CF-11柱进行纯化得到长双链RNA。最后利用大肠杆菌III型RNA酶将长双链RNA切成12-30bp的小干扰RNA。得到的siRNA用分光光度法检测其纯度与浓度,OD260/OD280=1.978,表明样品的纯度相当高。每100g大肠杆菌菌体得到siRNA样品约为210mg。  
国际公布  
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