| 公开(公告)号 | CN1453361A |
| 公开(公告)日 | 2003.11.05 |
| 申请(专利)号 | CN03128996.7 |
| 申请日期 | 2003.05.30 |
| 专利名称 | 一种抗癌靶向可调控基因－病毒的构建方法 |
| 主分类号 | C12N15/86 |
| 分类号 | C12N15/86;C12N15/63;C12N15/12;C12N15/861;C12N7/01;A61K48/00;A61P35/00 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国科学院上海生命科学研究院 |
| 发明(设计)人 | 裴子飞;李兵华;邹卫国;孙兰英;顾锦法 |
| 地址 | 200031上海市徐汇区岳阳路320号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 上海智信专利代理有限公司 |
| 代理人 | 肖剑南 |
| 国省代码 | 上海;31 |
| 主权项 | 一种抗癌靶向可调控基因-病毒的构建方法，其特征在于包括下列步骤：一、克隆质粒pRS-hTERT/Trail的构建反式作用元件表达盒，即表达盒-1的构建：用限制性内切酶消化质粒pAd/hTERT，回收hTERT启动子片段再插入到克隆载体pBluescript的多克隆位点，得到pBS-hTERT；用限制性内切酶切割pBS-hTERT，将含有hTERT启动子片段克隆到pRS-17的相应位点，替换出pRS-17原有的TTR启动子，得到质粒pRS-hTERT；抗癌基因表达盒，即表达盒-2的构建：从pCA13-Trail中用限制性内切酶切出Trail基因，克隆到中间载体的相应位点，然后再通过基因克隆的方法插入pRS-hTERT的ClaI位点，得到克隆质粒pRS-hTERT/Trail；二、包装质粒pGL-hTERT/Trail的构建用限制性内切酶把克隆质粒pRS-hTERT/Trail的两个表达盒切出，连接到质粒pGL的酶切位点上，得到包装质粒pGL-hTERT/Trail；三、病毒的包装用限制性内切酶切割包装质粒pGL-hTERT/Trail使之线性化，与辅助病毒共转染到包装细胞293Cre4中；四、病毒的收集纯化挑选单克隆，鉴定后大规模培养，收集细胞培养物，经梯度离心纯化病毒。 |
| 摘要 | 本发明属生物技术领域。本发明提供了一种抗癌靶向可调控基因-病毒的构建方法。本发明构建了携带有反式作用元件(trans-activator，TA)表达盒以及抗癌基因表达盒的无肠腺病毒或AAV。这两个表达盒结构相对独立、功能直接相关，使得目的基因的表达受hTERT控制仅限于肿瘤细胞并受小分子药物RU486的诱导，需要时打开，不需要时关闭，这样既避免了外源基因产物对正常组织的伤害，也实现了外源基因的长久表达(至少一年以上)。克服了传统的腺病毒载体靶向性差、目的基因表达不受控制以及表达时间短等缺点。本发明构建的无肠腺病毒载体，可以开发出有效的治疗肿瘤的抗癌新药。 |
| 国际公布 |
