公开(公告)号
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CN1453361A
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公开(公告)日
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2003.11.05
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申请(专利)号
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CN03128996.7
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申请日期
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2003.05.30
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专利名称
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一种抗癌靶向可调控基因-病毒的构建方法
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主分类号
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C12N15/86
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分类号
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C12N15/86;C12N15/63;C12N15/12;C12N15/861;C12N7/01;A61K48/00;A61P35/00
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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中国科学院上海生命科学研究院
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发明(设计)人
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裴子飞;李兵华;邹卫国;孙兰英;顾锦法
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地址
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200031上海市徐汇区岳阳路320号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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上海智信专利代理有限公司
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代理人
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肖剑南
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国省代码
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上海;31
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主权项
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一种抗癌靶向可调控基因-病毒的构建方法,其特征在于包括下列步骤:一、克隆质粒pRS-hTERT/Trail的构建反式作用元件表达盒,即表达盒-1的构建:用限制性内切酶消化质粒pAd/hTERT,回收hTERT启动子片段再插入到克隆载体pBluescript的多克隆位点,得到pBS-hTERT;用限制性内切酶切割pBS-hTERT,将含有hTERT启动子片段克隆到pRS-17的相应位点,替换出pRS-17原有的TTR启动子,得到质粒pRS-hTERT;抗癌基因表达盒,即表达盒-2的构建:从pCA13-Trail中用限制性内切酶切出Trail基因,克隆到中间载体的相应位点,然后再通过基因克隆的方法插入pRS-hTERT的ClaI位点,得到克隆质粒pRS-hTERT/Trail;二、包装质粒pGL-hTERT/Trail的构建用限制性内切酶把克隆质粒pRS-hTERT/Trail的两个表达盒切出,连接到质粒pGL的酶切位点上,得到包装质粒pGL-hTERT/Trail;三、病毒的包装用限制性内切酶切割包装质粒pGL-hTERT/Trail使之线性化,与辅助病毒共转染到包装细胞293Cre4中;四、病毒的收集纯化挑选单克隆,鉴定后大规模培养,收集细胞培养物,经梯度离心纯化病毒。
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摘要
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本发明属生物技术领域。本发明提供了一种抗癌靶向可调控基因-病毒的构建方法。本发明构建了携带有反式作用元件(trans-activator,TA)表达盒以及抗癌基因表达盒的无肠腺病毒或AAV。这两个表达盒结构相对独立、功能直接相关,使得目的基因的表达受hTERT控制仅限于肿瘤细胞并受小分子药物RU486的诱导,需要时打开,不需要时关闭,这样既避免了外源基因产物对正常组织的伤害,也实现了外源基因的长久表达(至少一年以上)。克服了传统的腺病毒载体靶向性差、目的基因表达不受控制以及表达时间短等缺点。本发明构建的无肠腺病毒载体,可以开发出有效的治疗肿瘤的抗癌新药。
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国际公布
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