一种眼镜蛇神经毒素蛋白的融合可溶表达、重组毒素的酸解释放及其纯化方法
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公开(公告)号
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CN1453294A
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公开(公告)日
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2003.11.05
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申请(专利)号
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CN02117198.X
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申请日期
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2002.04.25
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专利名称
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一种眼镜蛇神经毒素蛋白的融合可溶表达、重组毒素的酸解释放及其纯化方法
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主分类号
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C07K19/00
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分类号
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C07K19/00;C12P21/02;C12N15/63
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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中国药品生物制品检定所
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发明(设计)人
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徐康森;王永保;刘兢
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地址
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100061北京市天坛西里2号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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北京元中知识产权代理有限责任公司
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代理人
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王明霞
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国省代码
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北京;11
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主权项
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一种融和方式可溶表达眼镜蛇神经毒素蛋白、酸解释放及其纯化方法，其特征在于所述的方法包括：(1)神经毒素基因的克隆；(2)可溶融合表达；(3)酸解；(4)酸解反应完成后，加入Tris碱至50mM，酸解液pH被调节至7.0左右，经电泳检查酸解完全后，进行凝胶柱纯化；(5)重组蛋白主峰收集，真空冷冻浓缩，脱盐，收集蛋白峰，测定重组蛋白浓度约为0.5mg/ml，重组神经毒素的最终得率为35.3％(以渗透休克获得量为1)；(6)重组神经毒素的综合得率纯化步骤 得率 纯度渗透休克 100％ 65％离子交换 82％ 90％酸解 63％ 28％凝胶过滤 76％脱盐纯品 91％ ＞95％最终得率 35.3％
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摘要
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本发明公开了一种眼镜蛇神经毒素蛋白的融和可溶表达、重组神经毒素的酸裂解释放及其生产纯化方法，包括天然毒素的理化性质及序列的测定、神经毒素基因的克隆和以融合方式的可溶表达、重组蛋白的融合位点的改造以及重组毒素的酸裂解释放以及纯化；采用本发明所述的用基因工程的方法表达生产重组神经毒素可获得大量可用于临床的重组神经毒素，可以使毒素的来源不受自然条件的制约。
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国际公布
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