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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺专利检索:专利号/专利人/发明人
    

基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺

公开(公告)号 CN1448507A  
公开(公告)日 2003.10.15  
申请(专利)号 CN02108299.5  
申请日期 2002.03.29  
专利名称 基因重组人源铜化物歧化酶的制备工艺  
主分类号 C12N9/08  
分类号 C12N9/08;C07K1/16;C07K1/18  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 四平市科学技术研究院  
发明(设计)人 董伟东;刘兆柯;路海源  
地址 136000吉林省四平市师院南路1号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 四平市新时代专利事务所  
代理人 孙国振  
国省代码 吉林;22  
主权项 一种生物工程基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺,其特征是:(1)、挑取工程菌单菌落接种在含苄的LB培养基斜面培养,然后接种到含AMP100μg/ml的LB培养基的三角瓶中,30℃、180转/分,振荡培养10小时,OD值达到1.0时,收集菌液;(2)、取上述菌液,以1∶10的比例,接种到含有AMP100μg/ml的改良M9培养基的发酵罐中,30℃培养6小时,OD值达2.5-3.0时,迅速升温至42℃,热激诱导表达,然后再培养3-4小时,离心收集菌体;(3)、取菌体,用0.9%的NaCl洗两次,然后用PH7.8TES缓冲液悬浮菌体,冰浴条件下搅拌30分钟,加入稀释6倍的TES溶液,冰浴条件下搅拌40分钟,离心取上清液,离心的菌体加TES溶液冷冻,取出速暖至冰水混合物状,加入稀释6倍的TES溶液,搅拌40分钟,离心取上清液,将上述,上清液经超滤浓缩,得粗酶液;(4)、粗酶液经透析:DEAE-Sephadex-A50离子交换柱层析,其全部进入胶面后,再用PBS缓冲液进行梯度洗脱,收集目的蛋白峰溶液,再用Sephadex-200分子筛柱层析,收集含Cu·Zn-SOD酶的活力部分,用PH7.8PBS溶液洗脱,自动馏分收集器收集,冷冻、干燥。  
摘要 本发明涉及一种生物工程,基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺,其特征是首先进行工程菌发酵扩增,热激诱导,收集菌体。经缓冲液抽提、再经离子交换、分子筛柱层析分离纯化。本发明具有工艺流程简单、SOD半衰期长、产量高、单位成本低等优点,本产品可广泛应用在化妆品、保健食品、医疗等领域。  
国际公布  
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