| 公开(公告)号 | CN1448507A |
| 公开(公告)日 | 2003.10.15 |
| 申请(专利)号 | CN02108299.5 |
| 申请日期 | 2002.03.29 |
| 专利名称 | 基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺 |
| 主分类号 | C12N9/08 |
| 分类号 | C12N9/08;C07K1/16;C07K1/18 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 四平市科学技术研究院 |
| 发明(设计)人 | 董伟东;刘兆柯;路海源 |
| 地址 | 136000吉林省四平市师院南路1号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 四平市新时代专利事务所 |
| 代理人 | 孙国振 |
| 国省代码 | 吉林;22 |
| 主权项 | 一种生物工程基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺，其特征是：(1)、挑取工程菌单菌落接种在含氨苄的LB培养基斜面培养，然后接种到含AMP100μg/ml的LB培养基的三角瓶中，30℃、180转/分，振荡培养10小时，OD值达到1.0时，收集菌液；(2)、取上述菌液，以1∶10的比例，接种到含有AMP100μg/ml的改良M9培养基的发酵罐中，30℃培养6小时，OD值达2.5-3.0时，迅速升温至42℃，热激诱导表达，然后再培养3-4小时，离心收集菌体；(3)、取菌体，用0.9％的NaCl洗两次，然后用PH7.8TES缓冲液悬浮菌体，冰浴条件下搅拌30分钟，加入稀释6倍的TES溶液，冰浴条件下搅拌40分钟，离心取上清液，离心的菌体加TES溶液冷冻，取出速暖至冰水混合物状，加入稀释6倍的TES溶液，搅拌40分钟，离心取上清液，将上述，上清液经超滤浓缩，得粗酶液；(4)、粗酶液经透析：DEAE-Sephadex-A50离子交换柱层析，其全部进入胶面后，再用PBS缓冲液进行梯度洗脱，收集目的蛋白峰溶液，再用Sephadex-200分子筛柱层析，收集含Cu·Zn-SOD酶的活力部分，用PH7.8PBS溶液洗脱，自动馏分收集器收集，冷冻、干燥。 |
| 摘要 | 本发明涉及一种生物工程，基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺，其特征是首先进行工程菌发酵扩增，热激诱导，收集菌体。经缓冲液抽提、再经离子交换、分子筛柱层析分离纯化。本发明具有工艺流程简单、SOD半衰期长、产量高、单位成本低等优点，本产品可广泛应用在化妆品、保健食品、医疗等领域。 |
| 国际公布 |
